在日常实验分析中,尤其是在方法开发时,您觉得哪些关键点会影响到实验结果?相信很多人会想到色谱柱、标准品、溶剂、净化小柱、滤膜等环节。小编却要提醒大家:千万不要疏忽了“样品瓶”这个不起眼的小部件哦,它可能会带来意想不到的麻烦!接下来就跟小编一起看看吧!
小分子药物举例
现象:
目标物(如抗病毒药物索菲布韦的前体)在不同样品瓶中放置一段时间后峰面积会有不同变化。
问题的关键点:
目标物在高pH条件下转化成了异构体。
图1. 目标物在高pH条件下转化成了异构体。
排查过程:
随机抽取不同厂家的样品瓶各10个,加入pH=6的去离子水浸泡2小时后测试pH值。
结果:
品牌A - 溶液pH升高到了9
品牌B - 溶液pH升高,且瓶间结果差异巨大
Waters TruView - 可以保持pH稳定,且结果精密度高
图2. pH=6的去离子水浸泡2小时后测试样品瓶的pH值。
建议:
在选择样品瓶时可以根据待测物的浓度及检测器种类参考下面选择指南进行。
多肽、蛋白举例
现象:
分析多肽或蛋白样品时常发生非特异性吸附,严重影响结果测定。
图3. 多肽或蛋白样品存储4℃放置24小时。
让我们看看,发生了什么?
▐ 生物分子(肽,蛋白)倾向于吸附到被暴露的表面
▐ 任何化学相互作用都能成为非特异性吸附的来源,例如:
疏水性相互作用:吸附到疏水性表面
聚丙烯材质
离子相互作用:通过离子交换作用所吸附
玻璃材质
▐ 生物分子会强烈吸附到表面上,不再回到溶液中
在吸附过程中,蛋白可能永久性变性(蛋白结构松解过程,也会加强疏水性作用与非特异性吸附)
分析物的损失,导致定量错误
沃特世QuanRecovery样品瓶及样品板均采用MaxPeak高性能表面(HPS)技术,解决了蛋白/多肽在样品制备阶段的非特异吸附问题,具有减少制备和储存阶段的样品损失及提高灵敏度与重现性等优势。目前该技术已被广泛应用于沃特世色谱柱及相关仪器硬件上。
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