前言
随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。
赭曲霉毒素是最常见的天然毒素之一，它是由赭曲霉和硫色曲霉产生的代谢产物，共有4种类型，其中赭曲霉毒素A的毒性最大且产毒量最高。赭曲霉毒素A具有肾毒性、神经毒性、免疫抑制等，大剂量使用才能引起肝病变，因此它被国际癌症研究组织列为2B类致癌物质。目前研究表明赭曲霉毒素A不仅在粮食中存在污染，其对中药材的污染也有报道。
本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的赭曲霉毒素A测定法，使用LabTech SPE 1000全自动固相萃取系统对常用中药（人参、枸杞、大枣）的赭曲霉毒素A进行富集净化，采用LC-MS检测，建立了一套中药的赭曲霉毒素A处理检测方法，采用免疫亲和柱净化样品，此方法回收率及平行性良好，标准曲线R2>0.99，加标回收率为92.0%~95.5%，重复性RSD为1.6%~2.7%，满足检测要求。
关键词：SPE 1000 2020版《中国药典》 赭曲霉毒素A 2351通则 MiniLab3000
1.仪器设备及试剂
1.1 仪器设备
1.1.1 SPE 1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；
1.1.2 SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500质谱系统（SCIEX中国公司）；
1.1.3 MiniLab3000全自动液体样品处理平台（莱伯泰科公司）；
SPE 1000全自动固相萃取系统
MiniLab3000全自动液体样品处理平台
1.2 试剂及耗材
1.2.1 甲醇（色谱级）；
1.2.2 蒸馏水；
1.2.3 赭曲霉毒素免疫亲和柱（3mL，Beacon）；
1.2.4 赭曲霉毒素A标品溶液（购自坛墨质检）；
1.2.5 氯化钠；
1.2.6 淋洗缓冲液（5g NaHCO3，25g NaCl，0.1mL吐温-20，用水稀释至1000mL）；
2.试验方法
2.1 样品处理
分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验，取供试品粉末约5g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠1g，精密加入80%甲醇溶液25 mL，均质2min（11000r/min），离心10min（4000r/min），取上清液5mL，用水稀释至25mL，离心10min（4000r/min），取上清液10mL作为后续实验样品。
2.2 免疫亲和柱净化
将2.1的10mL样品放入SPE 1000全自动固相萃取系统，按照图1所示的方法进行样品的净化步骤，收集净化液，用0.22μm滤膜过滤，待后续处理。
图1 赭曲霉毒素A净化流程
2.3 基质加标回收率实验
标准曲线配制：取对照品母液至MiniLab3000全自动液体样品处理平台上，按图2方法配制标曲。
图2 MiniLab3000全自动液体样品处理平台赭曲霉毒素A标曲配制流程
按2.1方法准备样品，进行加标实验，按药典所规定的定量限1μg/kg进行加标，然后按照2.2方法进行前处理实验，同时进行3个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。
2.4 LC-MS分析条件2.4.1 液相色谱条件
色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；
流动相：A: 0.1%甲酸溶液；B:甲醇；
流速：0.3 mL/ min；柱温：40℃；进样量：5 μL；
洗脱梯度：0min，55%B；5min，90%B；7min，90%B；7.1min，55%B；10min，55%B；
2.4.2 质谱条件
离子源：ESI源，MRM模式，负离子模式；
离子源参数：
IS电压：-4500V 气帘气CUR:35 psi；
雾化气GS1:55 psi 辅助气GS2:60 psi；
源温度TEM:550 ℃ 碰撞气CAD: 9 psi；
3.结果和讨论
3.1 各样品色谱图
图3 标准工作液LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）
图4 基质加标LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）
3.2 标准曲线
按2.3中的配制的对照品溶液计算得出标曲（以相对峰面积和浓度作标准曲线) 的线性方程、相关系数，见图5。
图5 赭曲霉毒素A标准曲线
3.2 加标回收率
加标样品经免疫亲和柱净化后，分别进行LC-MS分析、定量，计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表1所示。
表1赭曲霉毒素A加标回收率
4.结论
由图5、表2可知，2020版《中国药典》2351通则中赭曲霉毒素A测定法的标准曲线R2>0.99，加标回收率为92.0%~95.5%，重复性RSD为1.6%~2.7%，满足检测要求。
综上所述，莱伯泰科SPE 1000全自动固相萃取系统及MiniLab3000全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2351通则中规定的赭曲霉毒素A测定，适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。
参考文献：
[1] 刘蕊,赵新悦,毛雯雯,冯红,王亚东,张东浩,张兰兰.中药材中黄曲霉毒素及赭曲霉毒素A污染的研究进展[J].中国药物警戒,2020,17(02):117-120+128.
[2] 中华人民共和国药典2020年版. 四部［S］.2020: 30ChP 2020. Vol Ⅳ［S］. 2020: 30.
关于莱伯泰科
北京莱伯泰科仪器股份有限公司（股票代码：688056.SH）成立于2002年，是一家专业从事实验分析仪器的研发、生产和销售的科技型公司。公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，持续通过高新技术企业认证，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”，是全球范围内能将多种类和多功能的样品前处理技术与全自动实验分析检测平台组合成全自动实验分析仪器系统的主要实验分析仪器供应商之一。
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