前言
随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。
展青霉素是一种遗传毒性化合物, 具有潜在的细胞和动物毒性, 存在致畸性、致癌性和免疫毒性，是多种真菌的次级代谢产物, 广泛存在于多种植物作物及其制品中，所以展青霉素的残留问题已引起世界卫生组织的高度关注, 对其最低限量做了严格规定。
本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的展青霉素测定法，对常用中药（人参、枸杞、大枣）的展青霉素进行提取，用MultiVap-10定量平行浓缩仪对样品进行浓缩，并用MiniLab3000全自动液体样品处理平台配制标准曲线，采用LC-MS检测，建立了一套中药的展青霉素处理检测方法，此方法回收率及平行性良好，标准曲线R2>0.999，加标回收率为71.4%~91.7%，重复性RSD为5.0%~5.7%，满足检测要求。
关键词：MultiVap-10 2020版《中国药典》 展青霉素 2351通则 MiniLab3000
1.仪器设备及试剂
1.1 仪器设备
1.1.1 MultiVap-10定量平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；
1.1.2 SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500质谱系统（SCIEX中国公司）；
1.1.3 MiniLab3000全自动液体样品处理平台（莱伯泰科公司）；
MultiVap-10定量平行浓缩仪
MiniLab3000全自动液体样品处理平台
1.2 试剂及耗材
1.2.1 甲醇（色谱级）；
1.2.2 乙腈（色谱级）
1.2.3 蒸馏水；
1.2.4 展青霉素净化柱；
1.2.5 展青霉素标液（购自坛墨质检）；
1.2.6 氯化钠；
1.2.7 无水醋酸钠；
1.2.8 无水硫酸镁；
1.2.9 果胶酶（活性大于1500IU/g）；
2.试验方法
2.1 样品处理
分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验，取供试品粉末约5g（过二号筛），精密称定，加入水20mL和果胶酶75μL，混匀并40℃放置2h，精密加入乙腈60mL，均质2min（11000r/min），离心10min（4000r/min），取上清液20mL，加入无水醋酸钠∶无水硫酸镁（1∶4）3g，充分振摇2min，离心10min（4000r/min），取上清液8mL，通过展青霉素净化柱，收集净化液，取5mL净化液放入MultiVap-10定量平行浓缩仪中，按40℃、2psi条件进行氮吹浓缩至0.5mL以下，加2%乙腈溶液（乙酸调pH至2）定容至1mL，用0.22μm滤膜过滤，待测。
2.2 基质加标回收率实验
标准曲线配制：取展青霉素标品母液至MiniLab3000全自动液体样品处理平台上，按图1方法配制标曲。
图1 MiniLab3000全自动液体样品处理平台展青霉素标曲配制流程
按2.1方法准备样品，进行加标实验，按药典所规定的检出限展青霉素12μg/kg进行加标及前处理实验，同时进行3个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。
2.3 LC-MS分析条件2.3.1 液相色谱条件
色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；
流动相：A: 水；B: 乙腈；
流速：0.3 mL/ min；柱温：25℃；进样量：5 μL；
洗脱梯度：0~0.5min，20%B；1min，40%B；4min，75%B；4.1~5min，95%B；5.1~6.5min，20%B；
2.3.2 质谱条件
离子源：ESI源，MRM模式，正离子模式；
离子源参数：
IS电压：5500V 气帘气CUR:35 psi；
雾化气GS1:55 psi 辅助气GS2:60 psi；
源温度TEM:550 ℃ 碰撞气CAD: 9 psi；
3.结果和讨论
3.1样品色谱图
图2 基质加标LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）
3.2 标准曲线
按2.3中的配制的不同浓度标液计算得出展青霉素（以相对峰面积和浓度作标准曲线) 的线性方程、相关系数，见图3。
图3 展青霉素LC-MS法标准曲线
3.2 加标回收率
加标样品经前处理后，分别进行LC-MS分析、定量，计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表1所示。
表1展青霉素LC-MS法加标回收率
4.结论
由图3、表1可知，2020版《中国药典》2351通则中展青霉素的标准曲线R2>0.999，加标回收率为71.4%~91.7%，重复性RSD为5.0%~5.7%，满足检测要求。
综上所述，莱伯泰科MultiVap-10定量平行浓缩仪及MiniLab3000全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2351通则中规定的展青霉素测定，适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。
参考文献：
[1] 江曙,杨美华,段金廒,钱大玮.展青霉素研究现状及其对中药安全性的影响[J].南京中医药大学学报,2010,26(05):398-400.
[2] 中华人民共和国药典2020年版. 四部［S］.2020: 30ChP 2020. Vol Ⅳ［S］. 2020: 30.
关于莱伯泰科
北京莱伯泰科仪器股份有限公司（股票代码：688056.SH）成立于2002年，是一家专业从事实验分析仪器的研发、生产和销售的科技型公司。公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，持续通过高新技术企业认证，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”，是全球范围内能将多种类和多功能的样品前处理技术与全自动实验分析检测平台组合成全自动实验分析仪器系统的主要实验分析仪器供应商之一。
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