前 言
泛酸又名维生素B5,是一种重要的水溶性维生素,是脂肪酸合成类固醇所必需的物质,可参与亚铁血红色素、抗体等的合成。国标GB5413.17-2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定》中规定泛酸是婴幼儿乳粉中必须添加的物质,准确快速测定其含量有着重要意义。
目前测定泛酸的方法主要有比色法、微生物法和高效液相色谱法等。其中比色法适用于药品等含量高的样品;微生物法适于各类样品,但测定步骤繁琐,测定周期长;而高效液相色谱法因其操作简便、测定快速、结果准确等特点,更适于样品中泛酸含量的测定。本文利用东西分析液相色谱仪参考GB5413.17-2010建立乳品中泛酸测定的液相色谱法,供相关人员参考。
LC-5520液相色谱仪
实验原理
试样经热水提取等前处理后,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法定量泛酸的含量。
仪器设备与试剂
淀粉酶;
甲醇:色谱纯;
盐酸;
硫酸锌;
磷酸二氢钾;
磷酸;
泛酸标准品。
实验条件
色谱柱: C18 (4.6X250mm,5μm);
流动相: 磷酸二氢钾溶液(0.05mol/L)+甲醇=8+2,0.45μm微孔滤膜过滤;
流速:1.0mL/min;
柱温:30℃;
检测波长:200nm;
进样量:20μL。
样品前处理
称取混合均匀的固态试样约5 g或液态试样约20 g(精确至0.0001 g)于150 mL三角瓶中,固体试样加入约30 mL 40 ℃~50 ℃温水,振摇溶解后超声萃取20 min。(若样品中含有淀粉,称取样品后加入淀粉酶约0.2 g, 固体试样加入约30 mL 40 ℃~50 ℃温水振摇溶解,盖上瓶塞,在50 ℃~60 ℃条件下酶解30 min)。试样溶液降至室温后,用0.1 mol/L盐酸调节 pH至 4.5 ± 0.1,加入 5 mL 硫酸锌溶液,充分混合。转入 100 mL 容量瓶中,用水定容至刻度并充分混匀后,用滤纸过滤。滤液经 0.45 μm滤膜过滤后即为试样待测液。
谱图
本文参考GB5413.17-2010建立乳品中泛酸测定的液相色谱方法。该方法简单、快速,样品经沉淀蛋白质后直接用滤纸过滤,无需进行离心分离。同时在流动相的选择中,磷酸二氢钾与甲醇按8:2比例,泛酸可以得到有效分离。综上所述,该方法是测定泛酸含量较理想的方法。同时,该方法操作简便、易于掌握,可作为常规检验方法应用。
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