解决方案|液相色谱法测定水溶肥料中游离氨基酸含量

氨基酸水溶肥料，从字面上来看，就是含有氨基酸分子的一类肥料。它是农业生产中常用的一种多功能、环保型肥料。它将农作物生长过程中的各种营养元素合理的络合在一起，使用后能提高作物叶绿素含量，增强作物光合作用，能补充多种营养元素，满足整个作物生长过程中的养分需要，同时还能使作物健壮旺盛、根系发达、叶面浓绿肥厚、坐果率高、果实膨大快、果实丰满、品质好、产量高。也能增强作物抗旱、抗寒、抗病、抗重茬的能力。并且，肥料所含有的有机质、高活性有益菌群 ，可以有效抑制土壤中有害菌和病虫害的产生，能活化土壤，增加土壤的透气性，显著降低生理病害和土壤病害的发生，减少农药使用量，使农产品品质及产量提高。

氨基酸的含量在氨基酸水溶肥料中尤为重要。农业标准NY 1429-2010中规定了氨基酸有机肥（液体）的含量不低于100g/L，农业标准《水溶肥料游离氨基酸含量的测定》NY/T 1975-2010中对氨基酸的检测方法做了推荐，分别是氨基酸自动分析仪法和柱前衍生-液相色谱仪法。本文参考NY/T1975-2010，建立了柱前衍生-液相色谱法测定水溶肥料中游离氨基酸含量的方法，供相关人员参考。

LC-5510液相色谱仪

实验原理

试样用磺基水杨酸沉淀蛋白质后，用EDTA络合金属元素释放氨基酸，氨基酸经化学衍生后由液相色谱仪分离并测定天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸共17种氨基酸的含量，这些氨基酸含量的总和，即为肥料中游离氨基酸的含量。

仪器设备与试剂

LC-5510液相色谱仪（配UV检测器）；

实验室常用分析设备；

氨基酸分析方法包；

磺基水杨酸溶液。

实验条件

色谱柱：Amino Acid，5μm，（4.6×250mm）；

流动相：

流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH6.5）：乙腈=93:7

流动相B：水：乙腈=20:80

流速：1.0 ml/min；

柱温：40℃；

波长：254nm；

进样量：20 µL。

洗脱溶剂梯度洗脱见下表。

样品处理

标准品衍生

分别精称标准品溶液160μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL，旋紧盖子后振摇10s，室温下静置分层，去下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL水混合均匀，用孔径为0.22μm的有机滤膜过滤，待分析；

称取适量试样，置于250mL 容量瓶中，充分溶解后，加水至刻度，混匀。放置过夜后过滤，取2mL于10mL试管中，加入2mL磺基水杨酸溶液，混匀，放置1h。然后准确加入1mLEDTA-Na溶液，混匀，用0.45μm滤膜过滤。将滤液按照标准样衍生化方法进行衍生，待用。

按照下表表格配置氨基酸酸标准溶液，然后进样衍生，按照实验条件调整仪器待稳定后，将衍生后的标准溶液上机。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

将处理后的样品，按照实验条件进行检测，外标法测定游离氨基酸的含量。