尺寸排阻色谱法 (SEC) 是根据大分子药物的流体动力学体积进行分离的技术，对于大分子的聚集体分析尤为适用。这是对单克隆抗体 (mAb) 的一种常用的分析方法，因为聚集体可以通过峰面积的百分比来进行定量。
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IgG2 mAb的聚集体分析
在对IgG2 mAb的聚集体分析中，其特殊的疏水特性会导致回收率不佳。帕尼单抗是全人源化单克隆抗体，靶向表皮生长因子受体，目前用于结直肠癌的治疗。
通过使用适当的高离子强度的流动相，及高分辨率的SEC色谱柱，可以有效改善分析结果并实现良好的分离。如下图所示的色谱图中，使用200mM磷酸钾+250mM氯化钾（pH6.2）作为流动相，拖尾因子0.99能满足USP的要求。二聚体峰面积百分比为0.92。二聚体峰前的峰为全长抗体+抗体片段。
双特异性抗体的聚集体分析
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双特异性抗体是指一个抗体分子，可以与两个不同抗原或者同一抗原的两个不同位点相结合。艾美赛珠单抗是血友病A抗体患者的预防治疗药物，可显著降低A型抗体患者的出血事件频率。
在本应用中，我们对艾美赛珠单抗及其聚集体进行分析，同样采用200mM磷酸钾+250mM氯化钾（pH6.2）作为流动相。由于聚集体峰面积百分比小于0.2%，4.6mm内径SEC色谱柱上样量需要达到100μg以便充分定量。如下色谱图所示，在这样的上样量条件下，SEC柱没有过载，对峰面积百分比在0.2%以下的聚集体也能实现有效的分离和分析。
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