文库构建？从小白到大神，一文看懂磁珠的保存和使用！

磁珠的发明构想最初来自于挪威科技大学的化学家John Ugelstad，经过不断改造与完善，到目前已发展到纳米级别。磁珠的基础结构一般为三层，包括内层基质、中间层磁性物质(四氧化三铁)以及最外层官能基团修饰的高分子材料，因官能基团的不同，磁珠具有了不同的功能与应用。

图片来源 头豹研究院

生物磁珠是指具有细小粒径的超顺磁微球，一般具有超强的顺磁性。

• 1、在磁场中能够迅速聚集，离开磁场后又能够有助于磁分离地均匀分散。

• 2、具有合适的且差别较小的粒径，保证了足够强的磁响应性又不会沉降。

• 3、具有丰富的表面活性基团，以便可以和生化物质偶联，并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分离。

磁珠法核酸提取流程图

目前我们在文库构建中常用磁珠来进行多余片段去除(链霉亲和素磁珠)、片段分选、文库纯化，也常用来进行DNA纯化，以去除杂质，降低杂质对构建文库的影响。磁珠保存及使用过程中有一些关键因素会影响回收效率，下面我们一起来看一下。

拿到磁珠后首先看下保存条件，我们目前使用的磁珠一般为4℃保存，过低的温度(如-20℃)会破坏磁珠表面修饰，影响磁珠抓取效率，长时间常温放置也会影响磁珠的回收性能，因此磁珠用完后请及时放回4℃。一些磁珠需要避光保存，也请注意。

某些磁珠buffer为PEG，PEG分离效果易受pH、温度等影响，温度低PEG不易与水相完全互溶，所以磁珠使用前要平衡至室温。

磁珠使用前务必充分混匀，否则影响磁珠抓取效率。部分磁珠容易沉降，分磁珠过程中要多注意磁珠状态，沉降后及时进行混匀，避免因磁珠过少，导致片段抓取不完全，影响下游实验。

成品磁珠请按照说明书使用，特殊情况可咨询试剂公司后自行测试，自己配制的磁珠第一次使用前需使用Marker进行测试，确定最适比例。某些实验如片段分选步骤对磁珠比例要求比较严格，因此多样品时最好使用排枪分磁珠，正式分前先吹吸磁珠对枪头进行润洗，吸取磁珠后观察页面是否平齐，润洗并页面平齐后再分到所需的管子中。如中间需更换枪头，请注意枪头插取方式及力度与上次基本一致。

样本与磁珠混合后一定要按照说明进行孵育，此步至关重要。

有buffer存在的磁珠放到磁力架上去上清时，结合并不牢固，因此此时去上清允许底部有残留，以避免吸到磁珠，影响后续吸附效果。后面加乙醇后磁珠结合较牢固，此时弃上清可将底部吸干。

一般使用75%~80%乙醇对磁珠进行漂洗，乙醇要现配现用。乙醇浓度越高，体系中水越少，清洗盐离子的能力减弱，但DNA的溶解度小，回收率高；酒精浓度越低，盐离子可以清洗得更干净，但DNA的回收率可能会收到影响。

磁珠干燥时不可过干，也不可不干。干燥过程中可用10uL枪头来吸取残留液体，尽量避免酒精残留，否则可能会对后续实验造成影响。磁珠过干又可能导致磁珠无法从管壁洗下，或无法吹匀，影响回收效率。磁珠干燥时一般以磁珠刚出现龟裂或管子中无明显液体、磁珠表面无水光为好。

制版人：小久

原创声明:本文由欧易生物(OEBIOTECH)旗下青岛欧易学术团队报道

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