亚硝胺杂质被视为潜在的致癌物或可致癌化合物。为控管药品中存在的亚硝胺,美国FDA和欧洲药品管理局(EMA)规定了药品中亚硝胺可接受的每日摄入限量(纳克/天), 根据特定药品推荐的每日最大剂量,使用这些限值可确定药品中亚硝胺的阈值浓度。
二甲双胍是⼀种处方药,可用于治疗2型糖尿病患者的⾼血糖, 有几款二甲双胍药品由于NDMA含量超过了96纳克/天的可接受摄入限值而被召回。
药品中存在亚硝胺杂质会对⼈体健康构成极大风险,必须使用高灵敏度和选择性的分析方法进行监测,并要求精度达到亚ng/mL水平。本文主要介绍使用 Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪配合 超高效液相色谱ACQUITY Premier系统开发的方法用于检测和定量分析⼆甲双胍药物中九种亚硝胺杂质(NDMA、NDEA、NEIPA、NMOR、NDIPA、NDPA、NMPA、NMBA、 NDBA)的性能。
图1. Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪配合超高效液相色谱ACQUITY Premier系统。
样品制备
将每种亚硝胺各5.0 - 10 mg/mL的单标储备液溶于甲醇中,制备含九种亚硝胺(100 μg/mL)的混标溶液。用水连续稀释混标溶液,制备LOD、LOQ和线性标准溶液。
用水制备浓度为20 mg/mL的⼆甲双胍药物样品溶液,然后用0.2 μm/mL的 PVDF针头式过滤器(P/N: WAT200806)进行过滤以备分析。
液相色谱条件
液相色谱系统: ACQUITY Premier系统
检测条件: MS/MS
样品瓶: LCMS最大回收样品瓶,容积2 mL,P/N: 600000670CV
色谱柱: Atlantis Premier BEH C18 AX (2.1 x 100, 1.7 μm),P/N: 186009368
流动相A: 含0.1%甲酸和5 mM甲酸铵的水溶液
流动相B: 含0.1%甲酸和5 mM甲酸铵的甲醇溶液
质谱条件
质谱系统:Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪
电离模式:APCI+
采集:MRM模式,如表1所述。
表1. 使用Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪的MRM通道设置,所有亚硝胺的采集均设置为13点/峰和Auto Dwell(自动驻留)。
数据管理
仪器控制:MassLynx v4.2
数据处理:TargetLynx
结果与讨论
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本研究利用Xevo TQ Absolute质谱仪和ACQUITY Premier系统开发了⼀种高灵敏度方法,能够对⼆甲双胍药物中的亚硝胺进行超微量检测和定量分析。使用Atlantis Premier BEH C18 AX色谱柱完成出色的色谱分离。该方法显示出优异的定量性能,在纯溶剂和20 mg/mL⼆甲双胍药物中的LOQ分别达到0.01 - 0.1 ng/mL和0.025 - 0.1ng/mL。⼆甲双胍药物中亚硝胺的线性和准确度结果分别为R2 ≥ 0.999、回收率为85 - 110%。
本文所述的UPLC-MS/MS方法可对⼆甲双胍药物中的亚硝胺进行高灵敏度、高专属性和准确的分析,达到准确监测残留亚硝胺的目的,这对于产品质量和安全至关重要。