众所周知，亚硝胺是一钟致畸致癌变的物质，导致了从2018以来的100多种化合物的召回，其中就包括阿昔洛韦。阿昔洛韦是一种用于治疗带状疱疹和水痘的抗病毒感染的药品，在市场上应用十分广泛，因而其相关亚硝胺的标准显得十分重要。目前美国FDA已经修改了亚硝胺含量标准，对药品来说目前限度为30ng/g,相当于每日最大剂量为880mg/天。
鉴于亚硝胺在阿昔洛韦中不可避免的存在，其含量的分析也成为研究人员必不可少的工作。本研究中给大家分享一种阿昔洛韦中10种亚硝胺杂质的定量方法。具体信息如下：
样品浓度：40mg/ml
加标样品浓度：40mg/ml，亚硝胺标品25ng/g
液相条件：
色谱柱：Luna® Omega 3.0 µm Polar C18
规格：150x3.0mm
货号：00F-4760-Y0
流动相：
A: 0.1%甲酸水
B: 0.1%甲酸甲醇
梯度：
时间（分钟）
B%
0.00
2
1.00
2
20.0
98
22.0
98
22.1
2
24.0
2
流速：0.45mL/min
上样量：20µL
温度：35°C
检测器：MRM
质谱：SCIEX
MRM条件：
模式：APCI大气压化学电离
离子源温度：350°C
雾化气：45psi
吹帘气：35psi
碰撞活化解离：中等
雾化器电流：3µA
谱图及结果如下：
表1:定量分析结果：校准曲线均在0.025-20ng/mL范围内，相关系数均大于0.99，定量限研究均进行6次重复进样评估。总变异系数（CV）<20%，在定量限水平下，准确度在±20%以内
图1 10种亚硝胺杂质和阿昔洛韦原料药分离谱图
图2 10种亚硝胺杂质的定量校准曲线
图3 定量限下10种亚硝胺杂质谱图
图4 加标后的10种亚硝胺杂质谱图
表2 加标样品的准确度和变异系数
Compound
Accuracy(%)
CV(%)
NDMA
81.5
4.10
NDIPA
87.5
1.90
NMEA
80.5
3.90
NDEA
84.3
3.30
NPYR
82.1
10.4
NPIP
83.9
2.30
NMPA
84.5
7.90
NEIPA
85.6
1.90
NMBA
86.0
4.30
NDPA
82.7
4.10
结论
使用Luna® Omega 3.0 µm Polar C18 色谱柱可以在质谱系统上完成对10种亚硝胺杂质的定量分析，同时阿昔洛韦原料药和10种亚硝胺杂质均可以达到基线分离。Luna® Omega 3.0 µm Polar C18因其效果显著的分离分析结果，使10种亚硝胺杂质均在得到高度准确和可重复性的定量分析结果的同时表现出高度线性，从而达到阿昔洛韦的验收标准，满足相关监管要求，可以广泛应用于该药品分析和质控环节。
Luna® Omega Polar C18硅胶表面
Luna® Omega Polar C18 是一种新型的 UHPLC 固定相，可以在较宽的洗脱窗内提供独特的选择性，同时增强极性与非极性分析物的保留。它的 C18 配体可以提供疏水相互作用，同时极性基团修饰的颗粒表面增强了其极性保留能力，使之可以在100%水溶液中保持稳定。这些特性使 Luna® Omega Polar C18 成为极性与疏水化合物平衡保留的理想选择。
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