2022年,沃特世发布了UHPLC氨基酸分析解决方案,至此,沃特世的氨基酸分析方法包可覆盖全部液相平台。
但是,在不同平台上重现方法的时候,一方面,不同型号仪器的驻留体积和系统扩散的不同会引起保留时间的差异;另一方面,沃特世提供的氨基酸方案中使用了Empower的梯度曲线功能,有些仪器平台,比如1260,没有梯度曲线的功能,会达不到分离度的要求,导致方法转移失败。
为此,为了更好地进行不同平台间的方法重现,沃特世总部对UHPLC氨基酸原有方案(17种水解氨基酸标准品)在1260仪器上做了优化。
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增加仪器1260的体积来消除驻留体积的影响
驻留体积会影响保留时间,系统扩散会影响峰宽、灵敏度和溶剂效应。在实际的测试中,Arc HPLC系统具有更高的驻留体积和系统扩散。方法迁移时,在四元系统上调整驻留体积,缩短了保留时间之间的差异,并提高了灵敏度,峰形也更好。
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增加梯度延迟体积和洗脱梯度,减少梯度曲线的影响
在流动相梯度洗脱方法中,增加了0-2 min的梯度和13.09的洗脱梯度,通过增加延迟体积和洗脱梯度的方式,解决1260没有梯度曲线的问题,使氨基酸之间分离得更好,分离度更高。
优化方法后保留时间的比较:
1260 Infinity四元系统和Arc HPLC系统的保留时间一致,重复性范围均在0.0%至0.1%。
优化方法后峰面积重现性的比较:
1260 Infinity四元系统和Arc HPLC系统的各组分峰面积重复性范围均在0.0%至1.6%。
1260氨基酸仪器新方法
仪器系统:配备G1316B TCC SL的1260 Infinity四元系统-带色谱柱预加热器
检测器:TUV
色谱柱:AccQ•Tag Ultra 2.5 μm,4.6×150 mm(货号186010407)
流速:1.5 mL/min
柱温:43 ℃
检测波长:260 nm
进样量:3 μL
流动相A:AccQ•Tag Ultra Eluent A浓缩液(货号186003838)
流动相B:90:10 水:AccQ•Tag Ultra洗脱液B(货号186003839)
流动相C:水
流动相D:AccQ•Tag Ultra洗脱液B(货号186003839)
注:
细胞培养基及食品和饲料标准品未优化 — 这些需要进一步的方法调整
建议与17种水解氨基酸同样的优化方式进行调整