TOP5 论文赏析
蛋白纯化类磁珠
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磁珠应用方向
使用BeaverBeads™ His-tag蛋白纯化试剂盒对重组蛋白FLAG-ADAR1 和 HA-ADAR1进行纯化助力发现白血病治疗新靶标LNC-SNO49AB。
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中山大学的陈月琴教授和王文涛教授及其团队在Cell Discovery (IF:38.097)发表论文The snoRNA-like lncRNA LNC-SNO49AB drives leukemia by activating the RNA-editing enzyme ADAR1。研究发现并命名了一种新型的与small nucleolar RNAs (snoRNAs)相关的长非编码RNAs（lncRNAs）LNC-SNO49AB。LNC-SNO49AB包含两个C/D box snoRNAs序列，SNORD49A和SNORD49B，以及一个5′端m7G和一个3′端SNORD49A。并且发现LNC-SNO49AB可以直接与作用于RNA 1(ADAR1)的腺苷脱氨酶结合，并促进其同源二聚体的形成，从而提高RNA A-I的矫正活性以促进造血性恶性肿瘤的发生，表明LNC-SNO49AB可能是针对白血病治疗的一个新靶标。
在对LNC-SNO49AB在白血病中的致癌活性的分子机制的讨论中，实验将重组蛋白FLAG-ADAR1 和 HA-ADAR1在大肠杆菌菌株BL21 表达后使用BeaverBeads™ His-tag蛋白纯化试剂盒和flag-tag蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行纯化。随后用纯化的重组Flag-ADAR1和tRSA-LNC-SNO49AB进行体外RNA pull-down实验，发现在无细胞系统中，体外转录的LNC-SNO49AB可以与纯化的FlagADAR1蛋白结合。
图1 用纯化的重组Flag-ADAR1和tRSA-LNC-SNO49AB进行体外RNA pull-down实验
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磁珠应用方向
使用BeaverBeads™ His-tag蛋白纯化试剂盒将不同菌株裂解后收集P450s，随后使用BeaverBeads™ His-tag 蛋白纯化磁珠（IDA-Ni) 纯化P450s，助力提供改善细胞内血红素生物合成以提高P450s催化效率新策略。
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江南大学研究员赵鑫锐及其团队在ADVANCED SCIENCE（IF：17.521）上发表论文Whole-Cell P450 Biocatalysis Using Engineered Escherichia coli with Fine-Tuned Heme Biosynthesis。论文提供了一种改善细胞内血红素生物合成以提高P450s催化效率的策略。该策略通过以适当的比例综合表达必要的合成基因和使用DNA指导的支架组装限速酶来优化细胞内血红素的生物合成后再结合使用突变的血红素敏感生物传感器和小型调节RNA系统对细胞内的血红素水平进行微调从而提高三种不同的P450s（BM3、sca-2和CYP105D7）的催化效率。
为了确定C41(DE3)菌株、HEME-S13菌株和HEME-11菌株中P450s的表达水平，实验使用了BeaverBeads™ His-tag蛋白纯化试剂盒将不同菌株裂解后收集P450s，随后使用BeaverBeads™ His-tag 蛋白纯化磁珠（IDA-Ni) 纯化P450s用于后续的蛋白质浓度测定和SDS-PAGE分析。实验结果表明与原来的C41(DE3)菌株相比，在HEME-R11菌株中P450s的比例更高并对血红素生物合成进行了微调，从而提高了催化性能。此外， P450 sca-2mut和CYP105D7在HEME-R11菌株中的表达水平也得到提高。
图2 纯化的P450s在原C41（DE3）菌株、HEME-S13菌株和HEME-R11菌株中表达的滴度。P450 BM3mut, P450 sca-2mut和CYP105D7在·原C41(DE3)菌株、HEME-S13菌株和HEME-R11菌株中表达的纯化的P450s的SDS-PAGE分析。
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磁珠应用方向
使用BeaverBeads™ Protein A/G 免疫沉淀磁珠试剂盒HSPB8、BAG3和HSC70进行免疫共沉淀（Co-IP）试验助力SiNPs诱导自噬体累积机制的确定。
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首都医科大学的王继教授和她的团队在Small（IF:15.153）上发表论文Silica Nanoparticles Trigger Chaperone HSPB8-Assisted Selective Autophagy via TFEB Activation in Hepatocytes。该论文研究了SiNPs诱导自噬体累积的机制，通过构建了一个剔除自噬-溶酶体途径的主要调节者转录因子EB（TFEB）的（KO）细胞系，发现SiNPs会刺激TFEB核易位从而导致伴侣HSPB8的上调并与BAG3和HSC70形成伴侣辅助的选择性自噬（CASA）复合物，引发HSPB8辅助的选择性自噬。
实验中使用BeaverBeads™ Protein A/G 免疫沉淀磁珠试剂盒进行了免疫共沉淀（Co-IP）试验并使用Western blot进行分析，以测试HSPB8、BAG3和HSC70之间可能的相互作用。实验证明BAG3与HSC70和HSPB8结合，并且在TFEB KO细胞的免疫沉淀物中，HSC70和HSPB8水平的下降指明了TFEB KO对BAG3-HSC70-HSPB8复合物的形成的抑制作用。
图3 免疫共沉淀实验显示了L-02 细胞和TFEB KO细胞中BAG3与HSC70和HSPB8的相互作用
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磁珠应用方向
BeaverBeads™ GSH纯化GST-DHT1和GST-DHT1I232F重组蛋白，助力研究水稻突变体，发现植物激素Strigolactones（SLs）调控过程。
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中国农业科学院的万建民教授及其团队在THE PLANT CELL（IF:12.085）上发表了论文Dwarf and High Tillering1 represses rice tillering through mediating the splicing of D14 pre-Mrna。该论文通过研究水稻突变体dwarf and high tillering1（dht1）探究了植物激素Strigolactones（SLs）的调控过程，发现DHT1编码了单子叶特异性的类hnRNP蛋白，该蛋白是包括SL受体基因D14在内的pre-mRNA的内含子剪接因子。他们同样发现dht1（DHT1I232F）突变体蛋白的稳定性和RNA结合活性缺陷会导致D14前mRNA剪接缺陷和D14表达减少，从而导致SL信号缺陷的表型。
实验从WT Kitaake 和突变体中扩增了DHT1 和dht1基因的编码区以生成重组表达蛋白载体。PCR产物被克隆到载体pGEX-4T-1后生成的谷胱甘肽S-转移酶标记的重组蛋白构建体，GST-DHT1和GST-DHT1I232F被转化到BMRosetta（DE3）细胞中培养。表达GST-DHT1和GST-DHT1I232F的蛋白在诱导后使用BeaverBeads™ GSH对可溶性重组蛋白进行亲和纯化用于后续的体外RNA结合实验，发现DHT1I232F的突变可能削弱了其与RNA的结合能力，并且证实GSTDHT1可以特异性地与聚破了poly(U）结合。
图4 DHT1I232F突变体蛋白的稳定性和RNA结合活性受损
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BeaverBeads™ His-tag 蛋白纯化试剂盒用于纯化His标记的HSP101和AFD1融合蛋白，助力研究玉米孢子耐热性，发掘关键基因Ms42作用机制。
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中国农业大学农学院的金危危教授及其团队在THE PLANT CELL（IF:12.085）上发表了论文Heat shock protein 101 contributes to the thermotolerance of male meiosis in maize。该论文确定了相关玉米孢子高温耐受的关键基因Male sterile 42（Ms42）编码的HSP101在RADIATION SENSITIVE 51装载、DNA双链修复和随后的减数分裂中发挥作用，在花药中过量表达HSP101会产生强壮的小孢子，并增强耐热性。
实验将Hsp101的全长编码序列（CDS）和Afd1的978bp片段克隆到pET-28a-His的NcoI和XhoI位点。随后将His标记的HSP101和AFD1融合蛋白在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达并使用BeaverBeads™ His-tag蛋白纯化试剂盒对目标蛋白进行纯化以用于后续的Hsp101的表达分析。
图5 Hsp101的表达分析
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关于海狸
海狸创立于2011年，位于苏州工业园区，场地近18000㎡。企业专注于纳米磁珠技术的研发和产业化，服务于体外诊断、生物制药、动物疫病检测、环境检测、食品药品安全检测、生物科研等领域；提供纳米磁珠原料、蛋白偶联中间体、免疫标记与捕获磁珠、核酸提取磁珠及试剂盒、真菌毒素净化试剂盒等产品并辅助自动化设备及配套的生物耗材；拥有ISO9001和ISO13485国际质量管理体系认证，部分产品取得国内一类医疗器械产品备案及生产备案。
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