什么是ROX染料?
为什么在qPCR实验室
将其用作参比染料?
请在本期Applied Biosystems Taq Talk中寻找答案
如果您曾经了解过实时PCR预混液市场
那么您有可能听说过ROX染料
ROX 染料无处不在的原因又是什么呢?
ROX染料
ROX染料是惰性荧光分子,如果反应中存在ROX染料,就能够被实时荧光定量PCR仪检测到。但是与FAM、VIC和Applied Biosystems™ SYBR™ Green预混液报告基团染料不同,ROX荧光染料不会因为PCR扩增的结果而直接改变。相反,ROX的荧光信号保持不变。
现在您也许会问“这有什么意义?”其实,在任何实时PCR系统中,在报告基团分子激发和信号检测中,有几个潜在的孔间变异来源。
这包括孔中的气泡,甚至冷凝程度的差异等。
ROX对这些情况和其他变异来源进行归一化处理。在归一化过程中,提高了技术重复之间的数据精确度。
工作原理
假设我们正在观察反应板上的两个特定孔。将数量完全相同的相同样本移液到每个孔中并进行实时扩增。经过较短时间,达到30次循环。对于每一次循环,仪器都会读取报告基团染料的读数。
由于使用的反应组分相同,所以希望两个读数也相同。
遗憾的是,读数并不相同,因为这两个孔的系统不一致。相对而言,这些测量值也不准确。幸运的是,我们在这两个孔中使用了ROX染料。与报告基团相同,ROX染料也可以进行测量,实际上,ROX染料正在跟踪报告基团。换言之,系统不一致影响ROX的程度与其影响报告基团的程度相同。重要的是,仪器会在每次循环中采集成对的测量值。然后在运行快结束时根据相应的ROX测量值区分报告基团值。
因此,数据的精度就提高了。结果值称为Rn,代表归一化报告基团。关于ROX,还需要提到两个关键点。除去几个例外情况,Applied Biosystems实时PCR预混液在到货时就已经包含优化的ROX量,不需要进行添加。并同时提供不含ROX的预混液供您选择,以灵活适应您的实验需求。
其次,Applied Biosystems实时PCR软件将ROX默认为参比染料。了解这一点至关重要,因为如果您出于某种原因决定使用不含ROX的预混液,您需要将参比染料选择更改为“无”。
否则,软件会尝试将不存在的染料归一化。这是错误的。或者,如果您需要使用其他参比染料进行多重反应,例如Applied Biosystems™ Mustang Purple™染料,可以使用软件选择其他方案。
现在您知道ROX染料为什么会如此受欢迎了吧!
ROX染料是一种非常省力的工具,能够提高数据质量
让qPCR更加容易,同时获得更多的信息
ROX参比染料
扫码订购
ROX参比染料设计用于
在实时定量PCR或RT-PCR中对荧光报告基因信号进行标准化
为多通路定量PCR和RT-PCR提供稳定基线
使用现有ROX光谱设置,无需重新校准热循环仪
表1.ROX™参比荧光染料的适当用途
图1.操作准确无误时,采用ROX™染料(A)和不采用ROX™染料(B)标准化后,连续梯度稀释RNA酶P的实时荧光定量PCR扩增曲线。采用ROX™染料标准化后,重复样本的标准差为0.02,而不采用ROX™ 染料标准化的重复样本标准差为0.03
Applied Biosystems为您提供包含/不包含ROX的
多种qPCR系列预混液产品供您选择
总有一款预混液满足您的所有期待
点击查看大图进行扫码
点击阅读原文,了解更多qPCR预混液信息
您也可以关注赛默飞基因科学视频号
观看更多Applied Biosystems Taq Talk视频