新型单克隆抗体
目前靶向PD-1以及CTLA-4的T细胞免疫检查点抑制剂已经取得良好的抗肿瘤效果，但是卵巢癌这种恶性程度比较高的肿瘤对目前的免疫检查点疗法不敏感。而肿瘤细胞在被自然杀伤细胞（NK）攻击时，可通过下调细胞膜上糖蛋白的回收速率，快速堆积新生成的唾液酸化聚糖配体，增强其与NK细胞表面免疫抑制性受体—Siglec-7作用，进而抑制NK细胞杀伤活性[2]。因此靶向NK细胞Siglec-7的免疫检查点抑制剂也许是一些肿瘤的重要治疗靶点，特别是本身微环境中唾液酸化水平较高的卵巢癌（ovarian cancers，OC）。
来自美国Wistar研究所的Weiner博士和Mohamed Abdel-Mohsen博士团队合作设计出了新型单克隆抗体，这种抗体通过抑制性受体Siglec-7与自然杀伤细胞（NK）结合，从而激活免疫系统对抗癌症。该研究“Siglec-7 glyco-immune binding mAbs or NK cell engager biologics induce potent antitumor immunity against ovarian cancers”发布在最新一期的SCIENCE ADVANCES。
本文主要介绍了两种治疗方法，我们一起通过Figures来解析整个文章吧！
01
Anti-Siglec-7 mAb提高NK细胞抗肿瘤效力，与PD-1抑制剂联合起到协同抗肿瘤作用
体外通过抗体特异性筛选，从DB7.1, DB7.2和DB7.7种筛选出DB7.2进行后续研究。在xCELLigence RTCA上验证了DB7.2提高了效应细胞PBMC/NK对OC细胞系OVCAR10, OVISE-FSHR, PEO4和TOV-21G 的杀伤作用，结果均表明抑制Siglec-7均能显著提升效应细胞的肿瘤杀伤作用（Fig2）。
Figure2. 体外anti–Siglec-7 mAbs提升PBMC的杀伤作用。
另外研究者利用FC blockade以及FC mutation证明DB7.2发挥作用是通过抗体特异性识别来激活免疫杀伤(Fig3)。
同时发现对于BRCA2 mutation和PARPi耐受的卵巢癌细胞系PEO4细胞，DB7.2也有效的激活NK细胞的抗肿瘤活性(Fig3)。作者也验证了其他BRCA1, BRCA2, AKT2, TP53等免疫逃逸突变的细胞系，Anti-Siglec-7 mAb均能激活NK对这些靶细胞的杀伤。
另外，现有临床数据表明OC作为一种对免疫检查点阻断疗法反应不明显的癌症之一，接受免疫检查点抑制剂治疗后很少能产生持久的反应。然而也有研究表明组合疗法也许可以提升OC患者对免疫疗法的反应，因此研究者使用xCELLigence RTCA检测证明了DB7.2联合目前广泛应用的PD-1单抗可进一步增强抗OC肿瘤作用(Fig3)。
Figure 3. Anti-Siglec-7 mAb 和 anti–PD-1 mAb 联用进一步提高体外PBMC的杀伤作用。
体内药效研究，作者利用质粒系统在小鼠体内表达anti–Siglec-7 mAb DB7.2，随后接种OC肿瘤细胞，利用PBMC作为效应细胞进行抗肿瘤实验。结果表明体内表达DB7.2抗体可以有效阻止肿瘤的生长并提高小鼠生存率和延长生存时间，因此anti-Siglec-7 mAb有望成为治疗 OC 的潜在药物(Fig4)。
Figure4. 小鼠体内表达Siglec-7 抗体有效组织OC肿瘤生长。
02
anti–Siglec-7联合anti-FSHR的双靶点特异性抗体NKCE进一步提高抗肿瘤能力
研究者将靶向Siglec-7单抗DB7.2的scFV和靶向OC肿瘤相关抗原FSHR单抗D2AP11的scFV融合设计了双靶特异性抗体DB7.2XD2AP11 NKCE，并通过FSHR阴性的细胞验证了NKCE的off-target安全性（Fig5）。
然而FSHR阳性的OC细胞系OVISE, OVCAR3-FSHR, CaOV3, Kuramochi-FSHR和PEO4通过xCELLigence RTCA检测，在DB7.2xD2AP11 NKCE存在下被PBMC有效杀伤（Fig6）。
体内数据也表明DB7.2xD2AP11 NKCE可以有效抑制肿瘤生长并延长小鼠生存时间。
Figure 5. 构建靶向NK细胞的Siglec-7和OC细胞的FSHR双靶点特异性抗体DB7.2xD2AP11 NKCE
Figure 6. DB7.2xD2AP11 NKCE体外增强效应细胞杀伤OC细胞系
Figure 7. DB7.2xD2AP11 NKCE 体内诱导杀伤相关因子分泌并影响肿瘤的生长。
结 论
两种靶向Siglec-7 技术（mAbs 和 NKCEs）都展现了招募和激活 NK 细胞、杀伤肿瘤和延长动物存活时间的能力。这些靶向特异性表明，肿瘤的 Siglec表达可以被免疫疗法应用，也许毒性有限—但这对于未来靶向 Siglec 的抗肿瘤研究提供了一个充满希望的信号。
另外论文第一作者 Devivasha Bordoloi 博士也提到："我们在体外和体内模型中观察到了不止一种而是两种可以靶向 NK 细胞控制卵巢癌的方法。这项研究前景广阔，我很高兴能将这些研究推进到下一步。“
值得注意的是整个研究利用了Agilent xCELLigence RTCA平台检测靶细胞的杀伤。这种基于阻抗的技术可以实现无标记的灵敏检测，同时仪器内置培养箱保证在最适的环境下实现无人值守的细胞杀伤检测。这种简便方法已经被广泛用于CGT治疗的研发和质控放行，全面推动CGT药物的发展。
同时研究者为了直观的观察杀伤后靶细胞的情况，将RTCA阻抗检测与显微成像结合，在RTCA检测结束后以成像法观察孔中的细胞。而安捷伦RTCA eSight 仪器直接将阻抗和成像合二为一，阻抗检测的同时可实现明场和红绿蓝三色荧光的多参数成像检测，以更直观的角度捕捉细胞的实时活动变化，并在抗体药的ADCC、抗体内吞、中和细胞毒以及增殖抑制的检测中提供更灵敏直观的检测方法学。关于更多RTCA eSight阻抗和成像在抗体药方面的应用文章，请点击下图查看原文。
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参考文献
1. Siglec-7 glyco-immune binding mAbs or NK cell engager biologics induce potent antitumor immunity against ovarian cancers. 2023. Science advances, 9(44), eadh4379. https://doi.org/10.1126/sciadv.adh4379
2. Modulation of Siglec-7 Signaling Via In Situ-Created High-Affinity cis-Ligands. ACS Central Science 2021 7 (8), 1338-1346. DOI: 10.1021/acscentsci.1c00064
3. Wistar Scientists Engineer New NK cell Engaging Immunotherapy Approaches to Target and potentially Treat recalcitrant Ovarian Cancer. https://wistar.org/news/press-releases/wistar-scientists-engineer-new-nk-cell-engaging-immunotherapy-approaches-target
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