核糖核酸酶A
核糖核酸酶A（Ribonuclease A，缩写RNase A），是一种含4个二硫键的单链多肽，分子量约为13.7kDa（氨基酸序列）。RNase A是一种核糖核酸内切酶（endoribonuclease）。
核糖核酸酶层析纯化思路
提取及粗纯方案
我们基本采用牛胰腺硫酸铵盐析粗提物（由McDonald根据Kunitz氏纯化方法修改，“Methods in Enzymology”，Vol.ⅡP429，1955.）。
精纯方案
我们使用CM Tanrose 6FF为层析介质。这是月旭科技研发的一款高流速琼脂糖基架弱阳离子交换介质填料。以6%高度交联的琼脂糖为基架的介质，平均粒径及粒径范围分别为90μm，45-165μm，具有流速快、分辨率高的优点，是大规模生物分子分离纯化的首选介质。洗脱后的核糖核酸酶A纯度可提升至71~86%，并通过进一步去杂后，最终纯度大于95%，最终收率约56%。
下面分享一下层析条件▷
层析柱填料：CM Tanrose 6FF（货号：00062-53002）。
样品：牛胰腺粗品（含多种杂蛋白）。
程序运行：
缓冲液B，3CV，2.5mL/min
↓
缓冲液A平衡，13CV，2.5mL/min
↓
上样环上样，2.5mL/min
↓
缓冲液A洗杂，8CV，2.5mL/min
↓
缓冲液B线性梯度洗脱，0-40%B，10CV， 2.5mL/min
离子交换层析结果分析
对层析上样液，洗脱液进行SDS-PAGE电泳跑胶，通过凝胶成像仪分析。
图1：核糖核酸酶A经离子交换层析纯化图谱
图2：层析柱上样液
图3：层析柱洗脱液
图4：经后续纯化处理后
样品经层析纯化后，通过SDS-PAGE数据分析可知：经一步层析纯度提升至82.4%，显示了填料的高分辨率。
结论
通过对牛胰腺盐析粗提物处理，上样CM Tanrose 6FF进行RNase A的分离纯化，其纯度得到了很大的提升，去除了较多的杂蛋白，经后续一定的处理后，跑SDS-PAGE胶，凝胶成像仪分析显示单一条带，符合纯化要求。
作者：余新勇
排版：吴梦琳
审核：栾建明
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