食品中防腐剂的测定-紫外可见分光光度法
一、实验目的
1、了解紫外可见分光光度计仪器的基本结构和原理；
2、学会紫外可见分光光度计仪器的操作技术；
3、了解食品中防腐剂的测定意义；
4、学会用此法测定山梨酸。
二、基本原理
用三氯甲烷从样品中提取出山梨酸，再以碳酸氢钠提取，使山梨酸形成钠盐溶于水溶液中，山梨酸钠水溶液在254nm处有最大的吸收峰，测其吸光度可对其定量。
三、仪器和试剂
1、仪器
（1）紫外分光光度计UV-2450（岛津），石英比色皿
（2）组织捣碎机
2、试剂
（1）三氯甲烷：以三氯甲烷体积之半的碳酸氢钠（0.5mol/L）提取两次，用无水硫酸钠干燥，过滤备用。
（2）0.5mol/L碳酸氢钠：取21克碳酸氢钠溶于500毫升水中。
（3）0.3mol/L碳酸氢钠：将13.6克碳酸氢钠溶于500毫升水中。
（4）6mol/L盐酸
（5）山梨酸标准液（100微克/毫升）：准确称取100毫克山梨酸于1000毫升容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氢钠稀释至刻度，使用时再稀释成50ug/ml的山梨酸标准使用液。
四、实验步骤
1、样液的制备：称取50.0克样品加450毫升水于组织捣碎机中，搅5分钟，取10克匀浆于50毫升容量瓶中，以水定容，移取10毫升此溶液于分液漏斗中，加6mol/L盐酸1～2滴酸化，用50毫升氯仿提取1分钟，将氯仿层分至250毫升带塞锥形瓶中，用3克无水硫酸钠干燥，振摇后静置。
2、标准曲线的绘制：取25毫升比色管5支，分别加入山梨酸标准使用液0、0.5、1.0、1.5、2.0毫升，用0.3mol/LNaHCO3稀释至刻度，于254nm处测吸光度，作标准曲线。
3、样品中山梨酸的测定：取上述氯仿液25毫升于125毫升分液漏斗中，用25毫升0.3mol/L碳酸氢钠提取1分钟，静置分层后，小心放出氯仿层，测水层吸光度，从标准曲线中找出山梨酸的含量。
五、数据处理
1、绘制标准曲线、得出线性方程及相关系数R，并算出25ml提取液（氯仿样液）中所含山梨酸的量（g）
W：样品质量（g）
X：25ml提取液（氯仿样液）中所含山梨酸的量（g）（从标准曲线查得）
六、仪器操作规程
1、打开计算机电源，启动Windows系统；
2、打开仪器电源开关；
3、打开电脑桌面仪器工作站图标，点击“链接”，仪器自动进行自检，预热30分钟；
4、基线校正：进入程序操作界面→方法设定→置入空白（参比）溶液→点击仪器条上“基线”，点击“确定” →点击“λ到波长”，输入一适当波长值，点击“确定” →点击“自动调零”（基线校正1-2次）；
5、样品测定：置入样品（参比置于内池，样品置于外池）→点击“开始”（吸光度测定）→保存图谱及数据，数据处理→结束；
6、测定完毕后，点仪器条上“断开”，关闭仪器工作站程序→关闭仪器电源开关→关闭电脑主机→关闭总电源。
七、注意事项
1、在开启仪器前，一定要先熟悉仪器操作规程。
2、注意比色皿的拿取，小心操作。
3、移取酸液时小心操作，防止被酸灼伤。
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