2.3 数据分析方法
使用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索,具体参数如下,流程图如图 2 所示:
数据库:融合蛋白对应的氨基酸序列;
一级质量偏差:20 ppm;二级质量偏差:0.02 Da;三级质量偏差:0.8 Da;
酶:trypsin+Chymotryspin;
酶漏切位点:2;
图 2. Proteome Discoverer 1.3 软件对 ETD-triggered CID 原始数据进行二硫键定位分析的流程示意图
3. 结果与讨论
3.1 以肽段 P1:SKQEGCRL-肽段P2:CRPGF为例:
a. 色谱质谱提取流图如下所示:
由上图可以看出,该肽段对应的一级母离子在 13.96 min 洗脱出来,相应的质量偏差在 5.4 ppm。
b. ETD 二级碎裂匹配图
由上图可以看到,二硫键连接的两条肽段在经过 ETD 碎裂后,不仅产生了相应的两条肽段的碎片离子,而且也同时产生了二硫键连接在一起的其它碎片离子信息。
c. CID 三级碎裂匹配图