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ETD-triggered CID 方法应用于融合蛋白的二硫键分析(二)

2020.5.18
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

2.3 数据分析方法

使用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索,具体参数如下,流程图如图 2 所示:

数据库:融合蛋白对应的氨基酸序列;

一级质量偏差:20 ppm;二级质量偏差:0.02 Da;三级质量偏差:0.8 Da;

酶:trypsin+Chymotryspin;

酶漏切位点:2;

2017120155540495.jpg

 

图 2. Proteome Discoverer 1.3 软件对 ETD-triggered CID 原始数据进行二硫键定位分析的流程示意图

 

3. 结果与讨论

3.1 以肽段 P1:SKQEGCRL-肽段P2:CRPGF为例:

a. 色谱质谱提取流图如下所示:

 

2017120155623557.jpg

 

由上图可以看出,该肽段对应的一级母离子在 13.96 min 洗脱出来,相应的质量偏差在 5.4 ppm。

b. ETD 二级碎裂匹配图

 

2017120155645873.jpg

 

由上图可以看到,二硫键连接的两条肽段在经过 ETD 碎裂后,不仅产生了相应的两条肽段的碎片离子,而且也同时产生了二硫键连接在一起的其它碎片离子信息。

 

c. CID 三级碎裂匹配图

 

2017120155710939.jpg

 

2017120155725955.jpg

 


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