SDS-PAGE胶样品排列：
MUIBS1S1P1BS2S2P2UIT1T2T3T4
M：marker；上样10ul
UI：未诱导对照；10ul
BS：超声前样品；10ul
S：超声后上清； 10ul
P：超声后沉淀； 10ul
T：诱导后每隔1h样品，10ul
BS1，BS2表示诱导时IPTG浓度不同的两种诱导条件样品。S和P后的数字同理，Ti表示时间间隔为1h的诱导后样品。
增加目的蛋白以活性形式上清表达的方法
1．
低温诱导（15-30C）。37C诱导时大肠杆菌的代谢合成很快，使目标蛋白来不及充分折叠就形成包涵体。低温使细菌蛋白合成减慢，可能使蛋白表达在上清中。以及低温可以启动hsps的表达。该法可以与降低IPTG浓度同时使用。IPTG浓度降低可减少目的蛋白的诱导量。
2． 加入DNase/RNase，防止蛋白因与DNA/RNA结合生成IBs。
3． 超声前或超声后加入低浓度的表面活性剂，如2％Triton
X-100，Tween-20等。这些活性剂能使一部分IB形式的蛋白融解，同时不影响蛋白活性。
4．
加入1-3%乙醇(v/v)，使大肠杆菌中hsps蛋白表达。Hsps蛋白可帮助蛋白折叠。乙醇的加入可将上清蛋白表达量增加2-3倍。由于hsps蛋白的表达在加入乙醇后20-30min，因此加入乙醇应在IPTG诱导前30min。该法只能少量提高目的蛋白在上清的表达量。
5． 加入终浓度为0.4M的蔗糖。或者甜菜碱和山梨醇。《抗体工程药物》
6．
更换带有在大肠杆菌中高度表达的蛋白tag的表达载体，如GST（26KD），Nus（50KD），或使目的蛋白分泌到胞外的tag，如pelB/ompT（22aa），Dsb（26KD）等。
7． 在培养基中加1-2％的葡萄糖可以抑制lac启动子引发的本底表达，而不会影响IPTG诱导的由tac启动子控制的表达。
表达质粒构建
表达质粒构建概括而言即是将GE上的目的基因插入pET28、30等表达载体上。一般插入至少2个表达载体上，提高蛋白表达的概率。
11．T载体和表达载体双酶切
System（20ul）
表达载体 12ul
双酶切buffer 2ul
限制性酶a/b 1/1ul
ddH2O 4ul
T载体双酶切10ul体系即可；表达载体切20ul体系。
37。C水浴30min～1h
有些限制性酶buffer需要加BSA，视情况而定。
双酶切后跑电泳，胶回收相应条带，进行连接反应。
12. 酶切产物的连接
System（10ul）
10×连接缓冲液 1μl
PCR目的片断双酶切产物 5μl
空质粒双酶切产物 2μl
T4 DNA连接酶 0.5μl
ddH2O 1.5μl
16C连接3h以上，一般3h后即可用于转化。也可置于4C连接过夜。
如T载体双酶切的目的基因条带比较淡，可以增加体积至6.5ul连接。连接时表达载体的量应该少于T载体双酶切产物的量，使之充分连接。
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