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分子克隆-蛋白表达实验指南(十五)

2020.7.27
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

  LB固体培养基
          Tryptone              1g
          Yeast Extract           0.5g
          NaCl                 1g
  Agar                 1.5g
  加蒸馏水至总体积为100ml,高压蒸汽灭菌。灭菌后培养基不烫手时加入抗生素
  
  2×YT培养基
          Tryptone              1.6g
  Yeast Extract           1g
  NaCl                 0.5g
  加蒸馏水至总体积为100ml,高压蒸汽灭菌
  
  10×SDS-PAGE电泳缓冲液
        Tris碱                      60.4g
        Glycine                     376g
        SDS                        20g
        先加1.3L水,溶解后蒸馏水定容至2L
  
  蛋白脱色液
      冰醋酸100ml, 甲醇100ml, H2O至1L
  
  1×PBS缓冲液
          NaCl                         4g
          KCl                          0.1g
          Na2HPO4 · 12H2O                  1.79g
          KH2PO4                                  0.12g
         先溶于400ml蒸馏水中,调PH值7.3,加水定容至500ml,高压灭菌
         10×PBS配置直接将相应的成分×10,配制方法相同
  
  Tris-Cl(1M)
          用800ml蒸馏水溶解121.1g Tris base,加浓盐酸调PH至所需值
          应使溶液冷至室温后,方可最后调定pH值。加水定容至1L。分装后高压蒸
  汽灭菌。Tris溶液的pH值因温度而定,温度每升高1C,pH值大约降低0.03单位
  
  6×SDS sample buffer
          甘油(100%)               30ml
          TrisCl(pH 6.8,1.0M)         15ml
          EDTA(powder)             0.22g
          SDS(powder)               6g
          溴酚蓝                            0.03g
          DTT                         0.6 mol/L
        Store in aliquots at -20C
  也可保存于室温,但是使用前加入1/20体积的巯基乙醇,使ME终浓度为715 mM
        配制时用沸水浴或电磁搅拌器加热,烧杯顶部用锡纸封闭,防止水分蒸发
        过滤除菌
  
  30%丙烯酰胺
          丙烯酰胺                    60g
          亚甲双丙稀酰胺              1.6g
          加蒸馏水至200ml
  
  TrisCl pH 8.8(1.5mol/L)
    在50ml蒸馏水中溶解18.2g Tris base,用1mol/L HCl调pH至8.8,补加蒸馏水至100ml。4度保存
  
  TrisCl pH 6.8 (1.0mol/L)
    在50ml蒸馏水中溶解12.1g Tris based,用HCl调pH至6.8,定容至100ml
  
  10%过硫酸胺(AP)
    1g AP溶于10ml蒸馏水中。4C不能长期存放,一般2-3周
  
  10%SDS
  称取20gSDS慢慢转移到约含150ml的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至200ml
  
      IPTG(1 M)
        用8ml蒸馏水融解2.38g IPTG配制成1 M的溶液,用蒸馏水定溶至10ml。用0.22um过滤器过滤除菌,store -20C

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