25 DETECTR达到了aM水平的灵敏度和≤7个碱基的特异性。例如，它能准确地检测出受试者携带的是哪种亚型的HPV。
图片来源：参考资料2和10
26 在同期Science论文中，张锋团队从三个方面着手完善SHERLOCK：多重化、定量化和去荧光。先说多重化：他们挑选了来自两个不同菌株的Cas13a和来自两个不同菌株的Cas13b。每个酶的crRNA不同，激活后能剪切的核苷酸对也不相同。这样，在理论上他们可以构建出一个有4个频道的多重分析方法。
图片来源：参考资料9
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在一个实验中，他们通过包括了两个Cas13b,
一个Cas13a，和一个Cas12a的SHERLOCK准确地检验出一个样品是否含有塞卡病毒（ZIKV）的RNA，登革热病毒(DENV)的RNA，
一个靶DNA或一个靶RNA。不同靶分子的信号通过四个不同的荧光频道（FAM, TEX, Cy5和HEX）分别显示出来。
图片来源：参考资料9
28 在定量化的方向上，他们发现以前SHERLOCK中RPA一步使用的引物浓度过高，导至DNA扩增跨越了指数线性增长阶段而达到饱和阶段，无法定量测量靶核酸分子。这次他们将引物系列稀释，找到了合适的引物浓度——240nM（中图）。改进后的SHERLOCK在较宽的样品浓度范围内（低至渺摩尔）可持续定量（右图）。
图片来源：参考资料9
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SHERLOCK虽然不需要PCR仪，但由于结果的显示还需要测量荧光信号，它无法真正做到“仪器自由”。这也限制了它在野外、居家、诊所、非医院场所和偏远地区的使用。张锋团队因此尝试开发金标层析格式的SHERLOCK，以通过颜色变化来读取结果。报告RNA两端的荧光素和淬灭剂被分别置换成biotin和FAM。如果报告RNA没有被剪断，金纳米颗粒－FAM抗体－FAM－报告RNA－biotin耦合物就会被strepavidin滞留在第一条线上，第二条线则不显色。如果报告RNA被剪断，金纳米颗粒－FAM抗体－FAM被释放，就能跑到第二条线上，被protein
A滞留。所以诊断结果的阳性或阴性可通过第二条线显色或不显色判读。这与验孕棒的使用类似。
图片来源：参考资料9
30 张锋团队用金标层析格式的SHERLOCK成功地检测到浓度低至2aM的塞卡病毒RNA。整个测试只需1小时。
图片来源：参考资料9
31 金标SHERLOCK也可以被用来做癌症病人的快速液体活检。从非小细胞肺癌（NSCLC）患者的唾液样品中，他们可以检测到游离DNA中是否含有突变的EGFR基因（L858R）。至此，从多重化、定量化和去荧光三个方面，张锋团队在实验室里完成了对SHERLOCK的第一次技术迭代。
图片来源：参考资料9
32 在下一篇Science论文中，张锋实验室与哈佛的Pardis Sabeti实验室合作，继续将SHERLOCK向产业化的方向推进。这次他们的主攻方向是病毒即时检测。近些年来，全球屡遭各种病毒瘟疫的肆虐。如果我们在疫情初发时，就能开发出快速、准确的现场诊断方法（POCT)，那么疫情的扩散就可以得到有效的控制。这个方法要非常robust（“皮实”、稳健、抗干扰）和便捷，适用于各种条件。为了直接从患者的体液样品中分析、读取信号，两个团队发明了HUDSON技术（Heating Unextracted Diagnostic Samples to Obliterate Nucleases）, 通过加热的方式（还加了TCEP/EDTA）先灭活核酸酶再灭活病毒，最后通过SHERLOCK诊断。所有反应都在一个容器内进行，不需要换液、提纯（与图20对比）。他们可以用HUDSON+SHERLOCK从患者的血清、唾液或尿样中高灵敏度地检测出塞卡病毒的RNA——荧光或金标两种格式都可以。
图片来源：参考资料15
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在疫区诊断时不但要知道是何种病毒感染，还要判断出是哪种病毒亚型。他们也设计了DENV的诊断套餐，从患者的体液样品中迅速诊断出含有哪种或哪几种亚型的DENV（右下图中上数第二个和第五个样品就携带两种亚型病毒）。这个套餐测试不是多重测试，而是把RPA扩增产物分成几份儿，通过不同的crRNA和相同的Cas13平行测定。测定结果非常准确，没有假阳性或假阴性结果。
图片来源：参考资料15
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