一、仪器
①微量孔板的洗孔器或移液器  有12个管可以洗整个的板。

②微量移液器  能够吸移5～200μL 液体。

③水浴  能够于100℃恒温,亦可用调至100℃的高压灭菌器代替作为流动蒸汽发生器。

④荧光计  用于 FS 检测。测量微量孔内容物的相对荧光量(MicroFLUOR Reader Dynatech Laboratories,或相当的)。

⑤光度计  用于 ME 和 VR 检测。测量微量孔内容物的相对色强度。需用一片550nm 滤片(Manual MICROELISA MR300或Automatic Microplate Reader MR700,Dynatech Laboratories,或等效的)。

⑥比色卡  用于 VI 检测。目测读取微量孔的内容物的颜色。

二、通则
检验盒中的各成分不用时,必须冷藏保存。检验盒仅为一次性使用。加过样品、试剂或冲洗液的孔杯不能再用。

每组实验样品,包括3个阴性和1个阳性对照抗原。所有的对照必须具有对实验有效的特有功能。(当心:对接合剂和含有NaN₃防腐剂的酶底物的稀释液,若将任一种含NaN₃的溶液弃于槽中,应用水冲去,以避免在水管中形成铅或铜的叠氮化物,这种化合物在震动(如锤打)时可能引发爆炸。底物稀释液和终止液是碱性的,能引发皮肤发炎,若与皮肤接触,应用水冲洗接触部位。)

用数据记录纸张以鉴别每个实验样品的位置。

对每一样品和试剂盒中的每一试剂,都应用一支单独的吸嘴以避免交叉感染。如用塑料槽分别装接合剂和酶底物,要确保不交互使用。

试剂盒中的各组分作为整体单位使用。不要把不同批号的组分混用。

三、样品制备
①前增菌  将样置于非抑制性肉汤中进行前增菌,可使沙门氏菌开始生长。所用方法随样品而异。应按常规标准方法如AOAC967.26A或Bacteriological Analytical Manual,7th ed.AOAC,Arlington,VA,Chapter5,sec.C,(细菌分析手册第七版)进行但下列样品除外。

生的或严重污染的样品以无菌操作称取25g 样品,放入灭菌的均质杯内,加入225mL 灭菌的乳糖肉汤,高速(20000min)均质2min。将均质液倒入灭菌的、带螺旋盖的500mL 广口瓶中,盖严瓶盖并于室温下静置60min。摇匀,用试纸测定pH值。如必要时用灭菌的0.5mol/NaOH 或 HCl调节pH值为6.8±0.2。在最终测定pH值前盖严杯盖并混匀。旋松瓶盖1/4圈,于35℃培养24h±2h。

②选择性增菌  按常规培养方法分别将前增菌后的培养液各1mL转种到亚硒酸盐胱氨酸肉汤和四硫磺酸盐肉汤,对所有的食品均于35℃培养6～8h。

③后增菌  从培养箱中取出选择性肉汤用手或涡旋混合器混匀从四硫磺酸盐管中移取1mL,转种于预热至35℃的装有1mL灭菌M肉汤的试管中。同样也从亚硒酸盐胱氨酸管中移取1mL 转种于另一支M肉汤管中,对所有的食品均于35℃培养14～18h。并将选择性增菌肉汤管放回35℃培养箱,继续培养16～18h。

④EIA 分析的样品制备  从培养箱中取出M肉汤管,用手或涡旋混合器将其混匀。从每支 M肉汤管中分别取增菌液0.5mL 放入一支清洁的带螺旋帽的试管中,在沸水浴或流动蒸汽中加热20min。③中剩余的M肉汤、四硫磺酸盐肉汤和亚硒酸盐胱氨酸肉汤冷藏于2～8℃,以便对任何 EIA 阳性样品进行证实。在 EIA 分析之前,将加热的M肉汤冷却至20～30℃。