大豆异黄酮的测定方法介绍

　　紫外分光光度法

　　大豆异黄酮结构中羟基和芳环形成较强的共轭体系，对紫外光有较强的特征吸收，所以可采用紫外分光光度法对大豆异黄酮进行含量测定，该法具有方法简便，重现性好等优点，但特异性较差。

　　色谱法

　　（1）薄层扫描法

　　薄层扫描法具有取样量少，操作简便，分离效果好等优点，但其薄层显色剂用量难以准确控制，人为误差较大。

　　（2）高效液相色谱法

　　高效液相色谱法是目前测定大豆异黄酮研究工作中应用最为广泛的一种方法，此法具有测定样品范围广、样品制备步骤少、成本低、分离效率高、灵敏度好、测定结果准确等特点，且有多种检测器可供选择。样品多采用不同浓度的甲醇、乙醇直接提取、超声或回流提取后用酸或酶水解后进行测定，也有经柱层析分离等方法。

　　（3）色相色谱法

　　气相色谱法具有进样量少、高敏感性、高选择性、高特异性等突出优点，但在测定大豆黄素和金雀素时需制备衍生物，样品制备步骤较多，耗时长且仪器较为昂贵，从而限制了该法的推广应用。

　　（4）毛细管电泳法

　　毛细管电泳法具有速度快、选择性高、分离散率高，经济及样品前处理简单等优点，已逐渐成为测定植物雌激素(尤其是大豆苷元和金雀异黄素)的常规方法之一。

　　（5）免疫检测法

　　时间分辨荧光免疫分析法荧光免疫分析中的时间分辨测量技术，是为了提高免疫分析法灵敏度和特异性而发展起来的．测定中根据标记物和干扰物荧光寿命的差异，选择性的测定标记物的荧光信号即为所谓的时间分辨测量技术。酶联免疫吸跗法经典酶联免疫分析法是一种基本的免疫铡定方法，其主要的实验步骤可概括为包被、洗涤、与特异性抗体反应、与酶抗抗体反应、显色和测定。