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案例分析|如何使用液相色谱法进行抗体蛋白糖型修饰分析

默克分析化学
2019.3.14

蛋白质糖基化是蛋白翻译后修饰(PTM)中最常见、结构最多样的一种修饰形式。糖基化的特定类型以及修饰位置在细胞发育、免疫、凝血和凋亡等许多生理和病理反应中发挥着重要作用。因此,了解蛋白质糖基化对阐明糖蛋白的细胞功能至关重要。

糖蛋白分析是一项具有挑战性的工作,因为它涉及到复杂的n -链和o -链糖分子的识别,而这些糖分子的结构往往非常相似。大量实例表明,亲水相互作用液相色谱法(HILIC)是一种成熟的分离和定量聚糖的分析方法。

BIOshell™ Glycan液相色谱柱是专为快速、高分辨率、可重复使用的亲水模式聚糖鉴定而设计,填料采用

采用右旋糖酐梯度作为外标,经荧光标记后,用正常相高效液相色谱法对多糖进行分析。在BIOshell™ Glycan HPLC柱上分析时,本标准给出从单体葡萄糖到约20个单位葡萄糖聚糖分析谱图。基于保留特性,这个梯形图可以提供校准参考,帮助识别更复杂的聚糖。

图1普鲁卡因酰胺标记的葡聚糖梯度分析谱图

在BIOshell™ Glycan液相色谱柱上对人源IgG聚糖样品进行分析,鉴定出20个不同的峰,在色谱图中可以观察到良好的分离和对称的峰形。

图2 普鲁卡因酰胺标记的人源Ig G糖链分析谱图

西妥昔单抗是一种人鼠IgG1嵌合单克隆抗体,抗表皮生长因子受体。它被用于治疗头颈部以及结直肠癌。抗体在Fc和Fab区域均存在n-糖基化,被证明会影响药物安全性和质量。

图3 普鲁卡因酰胺标记的西妥昔单抗糖链分析谱图

以上实例表明,BIOshell™ Glycan液相色谱柱能够帮助阐明这种抗体治疗蛋白的复杂糖基化,从而更好地了解药物的疗效

附  录

名称尺寸货号

2.1mm*50mm

50991-U

2.1mm*100mm

50993-U

BIOshell™ Glycan 2.7μm

2.1mm*150mm 

50994-U

4.6mm*100mm

50998-U

4.6mm*150mm

50999-U

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