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在肿瘤免疫治疗中，单克隆抗体是目前应用最广的疗法之一。利用杂交瘤库，筛选出与细胞表面抗原结合的抗体，是一个耗时耗力的过程，主要筛选方法是ELISA。然而，ELISA技术除了耗时耗力以外，由于采用变性抗原还可能导致假阴性结果，从而错过与天然构象表位结合的靶标。
为帮助广大用户解决该问题，Sartorius推出iQue PLUS高通量细胞筛选方案，采用即混即读的方式快速筛选杂交瘤库，一次试验即可高效完成整个初筛。
快速是iQue® Screener PLUS 平台的首要标准，它可以基于实验内容进行检测分析，并通过软件实现自动化，为解答复杂的生物学问题提供更深入的视角。
下面就让我们用实际案例来了解一下iQue® Screener PLUS 平台所带来的便利！
案例分析：
采用两种细胞系（分别表达对照抗原和靶抗原）来模拟杂交瘤筛选，并在一个孔中完成多重性筛选。Jurkat 45.01细胞系表达CD45（靶抗原），而对照细胞系Jurkat D1.1则不表达CD45。两种细胞系都表达CD3。用绿色荧光染料（Calcein AM）标记对照细胞。
将靶细胞和对照细胞以1:1混合，然后重悬至1x106 cells/mL，以此同时检测特异性和交叉反应性。anti-CD45抗体只与靶细胞结合，不与对照细胞结合，因此代表特异性靶标。anti-CD3抗体可同时与靶细胞和对照细胞结合，因此代表交叉反应性。
加入对照细胞，无论是交叉反应或非特异性结合，都为每个孔样本提供了内参，以此提高筛选成功率。加入一抗孵育30分钟后，然后加入检测抗体，再孵育30分钟，最后用iQue筛选仪检测。
iQue筛选结果：
为了测试抗体特异性及其检测范围，用连续浓度梯度的anti-CD45抗体进行测试。下图显示不同浓度anti-CD45抗体与CD45+和CD45- Jurkat细胞结合的水平。
采用iQue系统获取样本信号后，采用ForeCyt软件进行分析，可从原始数据立即得到筛选结果，包括与CD45+细胞特异性结合的孔，以及与CD45+和CD45-细胞交叉反应的孔。
对照细胞（绿色荧光标记）和靶细胞（无荧光标记）等比例混合后，分散到每个孔中。然后加入待测试抗体，如杂交瘤库中的上清，最后加入红色荧光标记的检测抗体。
总结：
iQue PLUS高通量细胞筛选仪为抗体筛选提供了一个快速高效的解决方案。通过同时检测与靶细胞和对照细胞的结合力，可将初筛中的多个步骤整合到一个试验中完成，同时避免错失天然构象表位的抗体。
该方法加入了孔内对照，增强了筛选结果的可信性，并显著提高了杂交瘤筛选流程的效率。
最后，还利用细胞编码技术，对多种不同细胞进行分类标记，从而实现一孔多重性筛选，包括交叉反应性、不同种属反应性检测等。
iQue® Screener PLUS 平台
即混即读（mix-and-measure），几分钟即可完成，细胞检测速度高达35,000 /秒
灵活的细胞编码（cell encoding）技术，每孔完成多重筛选，可实现交互式热图、透视图
基于天然构象的抗原，在活细胞水平进行筛选
流线型的简化方案，降低成本和操作差异
在初筛中同时检测抗体与靶抗原/对照细胞的结合力，即特异性
可针对空间构象表位进行筛选，从而减少假阴性结果
彩蛋
时间
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