小伙伴们还记得吗？我们在上一期向大家介绍了如何用WAVE 25来实现灌流培养。WAVE 25作为一个很好用的中小型灌流平台，不仅可以用于最终高密度细胞及蛋白质生产，也可给更大体积的生物反应器提供高质量、高密度的种子细胞。
那今天小编就向大家介绍用WAVE 25给XDR-2000 L细胞培养提供高质量的种子。
一开始，国内并没有多少人相信使用WAVE 25可以直接与2000 L生物反应器进行对接，或怀疑使用WAVE 25灌流培养提供的种子细胞是否能在后期的反应器中生长良好，或犹疑自己的细胞株是否能否适应这种培养模式。
直到第一个吃螃蟹的人出现，2年的时间，陆陆续续目前已有近10家公司多种不同的细胞株，均成功的使用WAVE 25 对种子细胞（N-1）灌流培养，直接与大规模生物反应器对接补料生产。
图1. WAVE 25 与 XDR 2000 对接方案图
使用WAVE 25 对种子细胞（N-1）灌流培养后，直接与XDR-2000对接进行补料生产，最大程度的应用了WAVE 25 的灌流培养模块。
整个培养工艺可以在2000 L生产过程中，节省1-2个较大规模一次性反应袋，一定量的培养基，减少技术人员操作和中间体转移的风险及时间成本。
培养进程
使用WAVE 25 提供高密度的种子主要有3部分的培养进程：
1）WAVE 25-批次培养，将培养体系从小体积扩增至大体积
2）WAVE 25-灌流培养，在同一体积中，将种子细胞由低密度扩增至高密度
3）XDR-2000-补料培养，最终蛋白生产
培养难点
1
什么时候开启灌流培养？
当WAVE 25中细胞密度达到补料生产的初始接种密度如2-5 E6 cells/ml后可以开启种子细胞的灌流培养。
起始测试灌流量可以以70-200 pCells/mL/day进行，以极限营养成分的消耗及渗透压 (Osm) 为辅助测试手段来调整灌流量的变化。
2
有没有参考结果？
GE Fasttrak 对CHO-S，CHO-DG44在种子阶段采用WAVE 25 灌流培养；
图2. CHO S 及 CHO DG44的WAVE 25 灌流培养结果
整个培养过程中，主要通过对转速，角度，和通气量的调节来维持细胞DO在设定值±5%。
图3. 使用WAVE 25 灌流培养时DO的波动情况
3
注意事项
最终应用于补料生产的细胞在种子阶段仅维持高活率是不够的，该种子细胞还必须处于指数生长期，才能维持与批次培养的种子细胞一致的补料生产结果。
参考资料： gelifesciences.com/upstream/29160932 AB
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