内毒素检测未来的发展趋势——重组 C 因子法

其中，凝胶法只能做定性判断，其他 4 种方法能够进行定量检测，通过标准曲线的绘制，计算出待测样品的内毒素含量。本文介绍的重组 C 因子法，通过内毒素结合并激活的重组 C 因子能够切割底物获得游离的荧光基团，荧光基团的释放与内毒素的浓度呈正比，从而使得内毒素被定量检测。与其他 3 种定量检测方法相比，具有更好的特异性，不受旁路 G 因子的干扰，见下图示意。

2021 年 2 月 5 日，国家林业和草原局、农业农村部发布公告（2021 年第 3 号），调整后的«国家重点保护野生动物名录»正式发布，将我国分布的鲎科动物（中国鲎、圆尾蝎鲎）升级为国家二级保护动物。随后，3 月 22 日，湛江安度斯发布公告称，由于受国家政策影响，内毒素检测试剂原料将受到严格管控，并表示迫于形势，决定停止供应以下产品：

文中表示，国内药品、医疗器械放行将面临困境，并建议药企、医疗器械企业尽早选择其他替代测试方法。对于经常使用内毒素检测试剂的小伙伴来说，这无疑是一则重磅消息，毕竟在内毒素检测方面，鲎试剂是中国药典通则规定使用的试剂之一，也是其中被应用地最为广泛的一种。

不过，我们可以同样在药典中找到解决之法——重组 C 因子内毒素检测方法就是传统鲎试剂内毒素检测方法的进化，目前已被多家全球监管机构所接受，是未来内毒素检测方法的发展方向：

Rhinogen^® 重组 C 因子内毒素检测正在引领内毒素检测的发展。

Rhinogen^® 重组 C 因子内毒素检测试剂盒是一种不依赖于动物源性成分，灵敏度高、特异性高、可稳定且持续提供的替代鲎试剂的内毒素测定试剂，使用此试剂进行内毒素检测具有相当的优越性：

rFC 法相比鲎试剂动态显色法具有更高的检测准确性

rFC 内毒素检测试剂盒的检测灵敏度高，检测范围为 0.005EU/ml-5EU/ml

不同批次的 rFC 内毒素检测试剂盒检测的标准曲线。表明产品具有良好的的批间一致性

葡聚糖存在时，LAL 显色法会受到 G因子旁路的干扰，而 rFC 法不受干扰

Rhinogen^®  重组 C 因子内毒素检测试剂盒可替代传统鲎试剂用于人用和动物用注射药物（如化学药品、放射性药物、抗生素类、生物制品等）及医疗器械（如透析液、植入式器械等）的原辅材料、中间产品、放行产品的内毒素检测。

试剂盒采用终点荧光检测，Molecular Devices 多款荧光/多功能酶标仪都能够满足检测需要，包括：SpectraMax Gemini 系列、SpectraMax M 系列、SpectraMax i 系列、SpectraMax Paradigm。

根据 Rhinogen^® 重组 C 因子内毒素检测试剂盒的要求，我们设置了统一的检测模板（如需要模板请咨询 Molecular Devices 公司）。酶标仪温度设置 37℃，分别在 0h 和 1h 进行相对荧光强度检测读值记作 T0 和 T1。所有孔的 ΔRFU=T1-T0，标准品/样品净 ΔRFU= 标准品/样品 ΔRFU- 阴性对照 ΔRFU。以内毒素工作标准品溶液浓度为横坐标，净 ΔRFU 为纵坐标绘图并进行 Log-Log 拟合，log(ΔRFU) = A*log（内毒素浓度 EU/ml）+B。

本次推送的第二篇文章中详细列举了使用 4 种不同型号的 Molecular Devices 酶标仪进行重组 C 因子法内毒素检测的方法及结果。数据结果表明，不同型号的酶标仪均能够进行重组 C 因子检测，标准曲线展现了优秀的线性，SpectraMax i3x R2 值达到了 1.000。多款仪器样品 2 复孔 CV 值小于 5%，展现了优异的复孔重现性；加标回收率在 82%~113% 之间，明显优于中国药典 2020 版要求 50%~200% 的范围。

同时，Molecular Devices 提供完整的合规解决方案，包括一整套符合 GLP/GMP 要求的仪器硬件确认和企业版软件，能够满足内毒素检测涉及到药物和医疗器械的原辅材料、中间产品、放行产品的检测，数据采集和分析软件及仪器硬件都必须符合相应法规的要求。