Arc 2D结合在线SPE技术，助力脂溶性维生素检测

近年来，随着研究人员的深入研究，许多脂溶性维生素的存在形式及其相对生物活性被越来越清晰地认识到（如表1）。这也引起了从业人员和机构对各种脂溶性维生素异构体在特殊食品如婴幼儿配方奶粉中添加方式和添加量标准的重新思考。

表1.各种脂溶性维生素异构体存在形式的相对生物活性

脂溶性维生素的检测一直以来都是对检测分析人员的巨大挑战，沃特世也一直致力于让分析人员获得更加简便高效的分析工具。之前我们也持续推出过各种解决方案（感兴趣的用户可以点击文末往期回顾查看相关推文）。

这次我们和行业专家合作，采用Waters Arc 2D二维液相结合在线SPE技术，深入分析这些脂溶性维生素异构体中的活性成分，为将来相关标准的更新升级提供了坚实的技术支撑，同时也帮助广大用户提前储备技术升级，灵活应对各种分析挑战。

图1. Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统连接示意图(a. 采用3个泵，1个进样器，1个检测器，1个色谱柱管理器和1个SPE切换阀的配置，显著节省所需成本；b. 一维和二维共用一个检测器，节约成本的同时，所有信号产生在同一张色谱图上，方便数据处理和数据阐述。C. 在线SPE采用卡套式结构，柱芯可拆卸和更换，降低维护难度和使用成本）。

首先基于Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统开发了维生素A、D、E同时分析的方法。结果如下图：

图2. Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统测试维生素ADE标准品色谱图（a. 采用在线SPE技术，可以实现样品皂化液的直接上样分析，大大简化了样品前处理流程，满足实验室日常检测的高通量需求;b. 沃特世独特的Oasis HLB 固相萃取填料做为在线SPE的主芯，非硅胶基质的聚合物特性能够耐受极高pH值皂化液的反复进样而保持性能的稳定性）。

在实际样品检测当中，我们发现维生素A、E和维生素D的浓度水平差距极大，同时检测几乎没有必要。同时我们也将目光集中在那些更感兴趣，且相对生物活性高的异构体上。

为此我们在这套Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统上，用相同的配置进行了三组不同的方法学考察。第一组考察了维生素D2、D3同分异构体的分析；第二组考察了天然水平的维生素A中活性最大的组分，13-顺式视黄醇和反式视黄醇的分析；最后一组考察了同时分析维生素A和E的活性组分。

图3. Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统测试配方奶粉中的维生素D(a.  一维谱图上的基质干扰峰可以看出在线SPE的脱碱、脱脂效果明显；b. 通过二维谱图可以看出，通过中心切割可以最大程度去除基质干扰物，获得极低的基线噪声，从而得到最低的检出限。c. 对于天然水平的维生素D分析，我们测试过最大500 μL的进样体积，对该水平的维生素D进行直接分析)。

图4. Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统分析牛乳中天然水平的维生素A(a. 全-反式-视黄醇和13-顺式-视黄醇是维生素A的主要活性成分，所以只需分析这两种异构体；b. 维生素A的出峰时间相对较早，共流出的基质比较多，在线SPE结合二维中心切割能够效有效去除干扰，实现分离的同时得到准确结果)。

图5. 同时分析营养强化奶粉中的分析维生素A和E的活性组分(a.  营养强化奶粉中的维生素A和E共有7个活性较大组分（见表1），达到完全的色谱分离是检测的基础；b. 采用Arc 2D系统能够完整的分理出这7个活性较大组分)。

Waters Arc 2D二维液相色谱接在线SPE系统，配置灵活，应用方法多样，可以帮助用户从容面对脂溶性维生素分析的各种可能要求：同时相同的配置也非常容易扩展到食品、化妆品和化工等应用领域。

通过跟行业专家的技术合作，对这些脂溶性维生素异构体中的活性成分深入研究，为将来相关标准的更新和升级提供了坚实的技术支撑。同时也帮助我们的用户提前储备技术升级，灵活应对各种分析挑战。

在线SPE技术的应用大大简化了繁琐的样品处理流程，提高了分析通量。同时沃特世专利的Oasis HLB SPE技术成熟且备受用户信赖，在高pH耐受性，稳定性、可靠性上都经受住了严峻的挑战。这种耐受性带来的直接好处就是由于不需要频繁更换SPE柱芯而带来的分析成本降低。

往期回顾

维生素ADE及其异构体完整应用方案

9种脂溶性维生素快速同时分离的单次进样色谱方法

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【网络讲座】乳制品安全与营养检测技术介绍