无菌检测，拒绝假阳性

耗材

胰蛋白大豆肉汤（TSB）（Gila/BD）、硫乙醇酸盐液体培养基（FTM）（Gila/BD）、TSB（Merck）、FTM（Merck）、胰蛋白大豆琼脂（TSA）（Merck）、玻璃反应管 - 30 mL（Borosil）、针头–0.90×70 mm、2OG×2¾（Sterican–B.Braun）、注射器–F Luer（Omnifix–B.Braun）。

设备

Sterisart®，培养箱，Combisart® 三联过滤支架，直排泵。

膜过滤

在隔膜取样试验中，对来自三种隔膜类型的分别10个Sterisart® 料筒（总共 30 个）进行了分析。

10个料筒中有一个（来自每种Sterisart® 容器类型）作为阴性对照。

在无菌条件下，在生物安全柜中往Sterisart®培养料筒中灌装生长培养基。将两个Sterisart®料筒放置在泵支架上，并使Sterisart®管路系统穿过泵头。使用封闭的翼形螺母塞密封每个Sterisart®料筒的出口。两个无菌通风过滤器不加盖。打开Y型分配器出口处的黄色管夹，并关闭相邻的白色管夹。将双针金属钉插入装有FTM的瓶子中，并开启Sterisart®泵。将预定体积（75 ml）的培养基转移到第一个料筒中后，关闭泵。打开Y型分配器出口处的白色管夹，并关闭相邻的黄色管夹。将双针金属钉插入装有TSB的瓶子中，并开启Sterisart®泵。将相似体积（75 ml）的培养基转移到第二个料筒中。使用培养料筒入口上方的两个夹具密封管道，从而切断管路。

将含有TSB的Sterisart®料筒在 22.5 °C下培养 24 天。其中TSB是用于检测低发病率真菌和好氧细菌的推荐生培养基。将含有FTM的Sterisart®料筒在 32.5 °C下培养 24 天。其中FTM是用于培养需氧、微需氧和厌氧微生物的推荐生长培养基。

隔膜取样

无菌条件下，在生物安全柜中从Sterisart®料筒中提取样品。从Sterisart®培养料筒的顶部、中部和底部提取三个样品，每个样品 100 μl，每天提取两次，共持续 17 天（3×2×17=102 个样品）。将提取的样品转移到含有无菌液体培养基、FTM和TSB的玻璃反应管中。含有TSB的小瓶在 22.5 °C下培养 14 天，含有FTM的小瓶在 32.5 °C下培养 14 天。通过对每个Sterisart®装置和相应的提取样品进行拍照，以便记录结果。

微生物计数

使用放置在无菌Combisart®过滤装置中的黑色网格膜过滤器，并连接至直排泵，以进行最后的检查。在Sterisart®料筒中培养 24 天后，将 60 - 70 ml TSB填充到漏斗中，并通过黑色薄膜过滤器过滤。使用无菌镊子将过滤器转移到TSA板上，并将该板在 36 °C下培养 3 - 5 天。然后检查这些板是否有微生物污染。

在 102 次隔膜穿孔并反复提取样本后，确定所有Sterisart® 料筒（3 × 9 个含有FTM，3 × 9 个含有TSB；第 10 个料筒含有FTM和TSB作为各自的对照）均为无菌，且在 24 天后未检测到微生物污染。（图1）

同样，所提取的样品也是无菌的，没有微生物生长，这表明Sterisart®隔膜可以实现高效和高度可靠的无菌取样。（图2）

当隔膜被多次刺穿或使用了不合适的针型时，可能会发生“结晶”的情况。在某些Sterisart®料筒中，仅在 36 次穿孔后就观察到微小颗粒。24 天后在黑色薄膜过滤器上收集这些颗粒，并监测其在TSA板上形成菌落的能力。这些颗粒即使在培养五天后也没有表现出任何生长迹象，这表明这些颗粒在本质上不具生物活性。根据其形态，我们得出结论，这些惰性颗粒是在注射器针头反复穿刺过程中从隔膜上剪下的橡胶碎片。这些碎片不会影响无菌试验的效果，并且几乎不会落入在生长培养基中。

结果表明，Sterisart® 料筒即使在连续提取 102 个样品后，仍然是一个封闭且无菌的装置。