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显微镜小课堂 | 细胞观察的“小Tips”

永新Nexcope显微系统
2022.3.31

     

您是否有过困惑,用显微镜观察细胞,成像对比度差,细胞轮廓不清晰,无法读取有用的图片信息。而反观论文中的细胞成像,图像衬度好,细胞核清晰可见,在高倍镜下甚至能对细胞器进行初步的观察成像。您是否认为是显微镜不够高端,需要对显微镜进行更换才能得到完美的成像,其实并不然。今天就让小编带您初步了解细胞显微成像的几个"小窍门"。

显微镜类型

用显微镜观察细胞一般有两种载体可供选择,一种是细胞培养皿或者细胞培养瓶等,适用于活细胞观察用。还有一种是用玻片或者计数板进行固定或染色,之后再进行观察。

↑  培养皿/瓶

       玻片→

倒置显微镜工作距离长,各光学部件设计适用于培养皿和培养瓶中的细胞观察。正置显微镜工作距离较短,物镜的矫正差较小,适用于有比较薄的盖玻片固定的细胞观察。

以下两款显微镜是永新Nexcope倒置显微镜和正置显微镜的巅峰之作,为您的细胞成像提供完善且全面的解决方案。

观察方式的选择

区别于病理切片的颜色丰富,对比明显,细胞无色透明,很难得到明显的相位差,从而难以在明场观察下得到满意的衬度。可以增大细胞衬度的最常用的观察方式有相称观察、浮雕相称观察和DIC观察。

观察方式对比

其中DIC (Differential Interference Contrast)即微分干涉相差成像,则可以对未经染色的透明生物样品进行观察,将样品中光路梯度的变化转变为强度的变化,梯度大的区域在观察视野中对比度高,呈现“伪立体”效果;DIC图像在样品边缘或者微小颗粒上的对比度表现特别明显,能显著提高光学显微镜的轴向分辨率。DIC是最行之有效的增大细胞衬度的观察方式之一。Nexcope 的 NIB900和NE900系列科研级显微镜均可实现DIC观察方式。

而相称是最为普及的解决细胞衬度问题的方式,有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。其特点是成像的细胞周围有一圈光晕,也正是因为光晕,导致细胞边界不清晰,细节呈现受到影响。

浮雕相称很好的解决了上述问题,斜射光照射到标本产生折射、衍射,光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影,从而使透明标本表面产生明暗差异,增加观察对比度,图像显示阴影或近似三维结构而不会产生光晕。Nexcope 的 NIB600 专为细胞观察设计,可以实现明场、相称、浮雕相称和荧光观察方式,是实验室活细胞成像的理想工具。

细胞染色

提高细胞成像的对比度,不仅可以从显微镜入手,也可以从细胞本身入手,进行细胞染色,使细胞在明场或者荧光下成像不同的色彩,从而增加对细胞的分辨能力。常用的细胞染色方法有瑞氏染色、巴氏染色、HE染色等,这几种染色方法均可帮助您在明场下实现细胞的清晰观察。利用荧光染料对细胞进行染色更可以对细胞的特定结构或者蛋白质进行染色,在荧光照射下呈现多种颜色,便于对细胞运动或者蛋白质等的代谢进行深入研究。

染色后的细胞

我们提供完整的、成体系的、成熟的生命科学显微研究的光学解决方案,提供正置显微镜、倒置显微镜、体视显微镜,更甚至于尖端生物医学显微成像设备,先进的 NIS 无限远光学系统,为显微镜提供无限扩展可能,能够提供明场、暗场、相称、微分干涉(DIC)、偏光等成像的显微仪器配置方案。从最基本的临床病理成像,到发育生物学研究、药物研发、分子生物学试验,再到更加深入的肿瘤研究、神经学及显微操作技术需求,我们的显微镜均能满足从生物体到单细胞,直至分子尺度的系统成像需求。

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