作为配体交换类型的手性色谱柱，Chirex 3126手性柱通过疏水作用将手性选择配体(D)-青霉吸附在反相填料上作为固定相。其原理基于手性选择配体和手性分析物通过与金属离子（通常为铜）配位形成可逆的非对映金属络合物而进行分离。由于 (D)-青霉也具有手性，手性化合物的立体化学将决定洗脱顺序。一般来说，能够与手性选择配体形成更为稳定络合物的对映体将保留更强而更晚洗脱。
同时，除了非衍生氨基酸及其衍生物，Chirex 3126同样适用于α-羟基酸等化合物的手性分析。
图1. Chirex 3126固定相示意图
丙氨酸：
乳酸：
2-羟基丁酸：
Alpha (α) = 分离因子 = k2/k1
注意事项：
1
色谱柱接入系统前需确保用硫酸铜溶液将系统管路置换完全
2
避免使用超过30%的甲醇，15%的乙腈和异丙醇
3
流动相中必须含有铜离子（硫酸铜，氯化铜或醋酸铜），铜离子浓度一般控制在0.2~3 mM
4
避免使用其他添加剂如酸（硫酸，盐酸等），碱（氢氧化钠，氢氧化钾等），盐（不含铜离子如氯化钠，磷酸二氢钾等）
5
色谱柱一般贮存于1 mM的硫酸铜溶液中即可
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