上一期氨基酸分析专题,我们重点关注了氨基酸衍生的得率问题。本期我们将继续对这个话题进行展开。
众所周知,各种氨基酸属于同一类化合物,但是不同氨基酸的结构还是存在差别的,结构差别会影响到他们的衍生速率。如果衍生试剂的量不足,不同氨基酸的得率就会有很大的差异,这势必影响数据的重现性。
为了进一步研究这一问题,我们设计了衍生试剂短缺的实验。实验中,反应快的氨基酸,衍生的比例会更多,峰面积更高;反应慢的氨基酸则峰很小甚至没有。
从下图可以看出,苯丙氨酸和缬氨酸的峰面积远远高于其它氨基酸,因此这两个氨基酸的反应性是最强的。鉴于这种反应速度的差异,保证衍生试剂比例的过量是必须的。
图1. AccqTag试剂不足时衍生氨基酸的色谱图
当衍生试剂足够,且比例超过5时,不论是反应慢的丙氨酸,还是更快反应的苯丙氨酸,都能完全衍生,它们的相对比例自然也是不变的(见图2),这个数据也可以作为我们分析问题的重要依据。
图2. 不同批次衍生氨基酸混标的丙氨酸/苯丙氨酸比例
下一期《氨基酸FAQ》中,我们将继续为您介绍影响衍生的其它因素,敬请期待~
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氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生