在过去的三期氨基酸衍生系列文章中，我们讨论了影响氨基酸衍生的原理和化学因素，在日常的试验中，当满足了这些条件后我们就可以完整标记游离氨基酸了。
除了这些静态因素，今天我们聊一聊影响氨基酸衍生的动态因素 — 氨基酸衍生的正确操作步骤。
我们知道AccQ·Tag衍生试剂反应非常迅速，也正因如此，衍生试剂必须最后加入，以防止其先行水解。如图1所示，先加入衍生试剂后，衍生试剂部分水解，从而导致氨基酸标记不完全，丙氨酸和苯丙氨酸比值明显降低。
图1. 衍生试剂加入顺序的影响
因此，氨基酸的衍生反应虽然只有三步，但必须严格遵守操作顺序，才能实现氨基酸完全衍生。正确地氨基酸AccQ·Tag衍生操作步骤见图2。
图2. 氨基酸Accq·Tag衍生操作步骤
在之后的氨基酸系列中，我们将结合各种氨基酸标准品，阐述如何实现氨基酸的完全标记，并结合实例，分析常见问题的产生原因。
往期精彩回顾
氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（1）
氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（2）
氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（3）
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