氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（3）

上一期氨基酸分析专题中，我们重点关注了氨基酸结构差别对衍生速率的影响。本期我们将继续探讨影响氨基酸衍生的因素。

AccQ·Tag衍生试剂中，发生反应的位点是其中的羰基，羰基带正电荷。而氨基酸上的氨基带负电荷较多，因此能够快速发生反应，实现衍生。

图1. AccQ·Tag衍生试剂结构式

但氨基酸毕竟是两性化合物，带负电荷的氨基也容易接收来自羧酸的质子，这就导致反应速度的下降。特别是酸性氨基酸，以及水解产生的氨基酸，如果无法消除质子化，必然影响衍生效率。

图2. 氨基酸解离示意图

因此，为了保证衍生反应的彻底进行，AccQ·Tag试剂盒中特别提供了pH缓冲液。从下图也可以看出，反应体系pH大于8.2时，方可确保最高的反应得率。

图3. 氨基酸衍生得率与溶液pH值关系

特别要注意的是，水解氨基酸检测时，由于体系中有较多的酸，对反应的得率会有较大的影响。

图4. 不同pH值衍生的氨基酸分析色谱图

如上图所示，加入氢氧化钠改变溶液pH后，反应的得率明显提高。实际应用中，这一方法会改变样品体积，因此较少采用。可以进行氮吹或冷冻离心浓缩，具体方法我们将在后期的《水解氨基酸系列》中专门讨论，敬请期待。

往期精彩回顾

氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（1）

氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（2）