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客户向我们提供了地黄苷D标准品溶液（液体）、地黄饮片和熟地黄（固体粉末）。希望本实验室能够按照2020版《中国药典》中分析方法，筛选合适的色谱，使地黄饮片和熟地黄中地黄苷D与其前后相邻杂质之间的分离度能够达到基线分离，同时，地黄苷D峰的理论塔板数应满足药典要求（不低于5000）。
我们按照2020版《中国药典》熟地黄含量测定项下方法，对地黄饮片和熟地黄进行了提取处理，然后按照药典方法，
在CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱上得到了良好的分析结果。
首先，下图为使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱，对地黄苷D标准品的分析结果。
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流动相：0.1%磷酸/甲醇 = 95/5
流 速：1.0 mL/min
温 度：35°C
检 测：UV 203 nm
浓 度：客户提供
进样量：10 µL
结果中，地黄苷D的保留时间为28.135 min，理论塔板数为13067，满足药典不低于5000的要求，峰不对称因子为1.00，峰形良好。
随后，我们使用同样方法对熟地黄和地黄饮片的实际样品进行了分析，结果如下图所示：
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流动相：0.1%磷酸/甲醇 = 95/5
流 速：1.0 mL/min
温 度：35 °C
检 测：UV 203 nm
浓 度：样品按药典方法处理
进样量：10 µL
地黄饮片中地黄苷D与其前后相邻杂质之间的分离度分别为1.52和1.88，熟地黄中地黄苷D与其前后相邻杂质之间的分离度分别为1.65和1.89，均可以得到基线分离。
然而从上面实际样品的结果可以看到，地黄饮片样品中地黄苷D与其前相邻杂质之间的分离度仅为1.52，刚刚达到基线分离，为了使其得到更好的分离，我们尝试对柱温进行调整，分别在30℃和40℃对地黄饮片进行分析，结果如下面两张图所示：
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流动相：0.1%磷酸/甲醇 = 95/5
流 速：1.0 mL/min
温 度：30°C / 40°C
检 测：UV 203 nm
浓 度：样品按药典方法处理
进样量：10 µL
在30℃柱温下，地黄苷D与其前后相邻杂质之间的分离度分别为3.25和1.88，能够得到良好的分离。在40℃柱温下，地黄苷D与其前后相邻杂质之间的分离度分别为0.90和1.66，地黄苷D与其前杂质未能达到基线分离，升温不利于分离。
针对药典中地黄饮片和熟地黄中地黄苷D的分析，我们总结了以下注意事项：
(1). 由于中药样品中成分比较复杂，在不同色谱柱上的分离情况差异比较大，建议客户在分析时，可根据具体分离情况，对有机相比例及柱温进行调整，以得到良好的分离。
(2). 地黄饮片及熟地黄中均含有疏水性较大的物质，我们进行80min的洗脱后，仍可能有疏水性物质未得到洗脱，建议客户使用高有机相进行冲洗。
综上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，按照2020版《中国药典》熟地黄含量测定项下方法，能够得到满足药典分离度和理论塔板数要求的分析结果。
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