今天YoYo为大家带来的是氨基柱的使用攻略——关于CAPCELL PAK NH2色谱柱，你应该知道的事：
★特长
★两种保留机理，及其对应柱效测定方法
★使用及维护方法
本篇干货攻略阅读时间大约需要10min~觉得自己看不完的建议先收藏~
准备好了吗~Let''s go~
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CAPCELL PAK NH2的特长
作为CAPCELL PAK家族的一员，CAPCELL PAK NH2 UG80具有以下优势：
★采用了聚合物包被技术，柱效更高。
NH2 UG80 在聚合物包被后的硅胶上导入多元胺，进一步形成含有一级氨基的构造。
★独特的桥式键合，使其与其他氨基柱相比耐久性更佳。
▲CAPCELL PAK NH2表面结构示意图
在UG系列中极性最强，常用于糖类、脂溶性维生素等物质的正相分离。尤其近年来水•乙腈系的正相分离系统也被归类于亲水性相互作用（HILIC）的高效液相色谱分析中。
▲CAPCELL PAK NH2 UG80对糖类的分析
依据《GB 5413.5-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定》方法（微调）可得到良好结果。
*注：峰上标数字为分离度。
HPLC Conditions:
Column: CAPCELL PAK NH2 UG80 S5；4.6 mm i.d. × 250 mm
Mobile phase: water / acetonitrile = 25 / 75（30 / 70 in GB 5413.5-2010 ）
Flow rate: 1000 μL /min
Temperature: 35°C
Detector: RI
Inj. vol.: 10 μL
Sample: Lactose 5 mg/mL, Sucrose 2.5 mg/mL, dissolved in water and diluted with M.P.
另外，作为弱阴离子交换色谱柱，在酸性流动相条件下填料表面带正电荷，适用于水溶性维生素或核苷酸类的分析。
▲CAPCELL PAK NH2 UG80对水溶性维生素的分析
▲CAPCELL PAK NH2 UG80对核苷酸类的分析
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保留机理&柱效测定
一、亲水性相互作用（HILIC模式）
适用范围：糖类、糖醇等化合物的分析
- TIPS -
a. 流动相条件一般为水/乙腈，且乙腈比例越高，对糖类的保留能力越强。
b. 若采用含甲醇或缓冲盐的流动相，峰会展宽。
c. 糖类样品溶剂为水时，色谱峰会展宽。请使用含乙腈50%以上的溶剂来配制糖类样品。
d. 曾在酸性条件下使用过的色谱柱，糖类分析的保留时间、峰形均会发生变化。
依据《GB 5009.8-2016 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》第一法（示差折光/蒸发光散射检测器）方法调整，对果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖进行分析。
*注：峰上标数字为分离度。
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6mm i.d. × 250 mm
流动相：水 / 乙腈 = 15 / 85（原方法：30 / 70）
流 速：1.0 mL / min
温 度：45 °C（原方法 40°C）
检 测：RI
进样量：20 µL
样 品：4 mg/mL （称取果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖标准品用水配制成 20 mg/mL的贮备液，用70%乙腈稀释至0.4 mg/mL）
柱效评价（HILIC模式）
评价标准物质：果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖
果糖
Fructopyranose
(M.W.180.16 )
葡萄糖
Glucose
(M.W.180.16）
蔗糖
Saccharose
(M.W.342.30)
麦芽糖
Maltose
(M.W.342.30)
以麦芽糖峰的理论塔板数作为衡量NH2色谱柱柱效的评判依据。下图为出厂报告单的示例，如果大家拿到柱子想自己测柱效，就可以按照出厂报告单上的条件进行测定~
▲CAPCELL PAK NH2 UG80出厂报告单示例
每一支大曹三耀色谱柱在出厂前均会进行柱效测定，符合相应标准才能出厂。
二、弱阴离子交换模式
适用范围：维生素C、核苷酸等化合物的分析
- TIPS -
a. 流动相条件一般为磷酸缓冲液/乙腈，且一般会对pH值进行调整。
b. 考察流动相条件时，可按照pH由高到低的顺序进行考察。
如果曾经在低pH（酸性）条件下使用，填料的表面将无法回到初始状态。
c. 有时需要长时间平衡色谱柱(24小时以上)。平衡所需时间与通液量和盐浓度紧密相关，因此，时间紧急时请提高流速，或pH不变而增加流动相的盐浓度来进行平衡。
使用CAPCELL PAK NH2色谱柱对葡萄糖注射液中的维生素C进行分析，如下图，峰①为维生素C，理论塔板数为17383，与其后相邻杂质峰间分离度为1.95，符合标准规定“理论塔板数按维生素C峰计算不低于7000，维生素C与相邻峰之间的分离度应符合要求”。
维生素C
Ascorbic acid
（M.W.176.12）
*注：峰①上标数字为理论塔板数，峰②上标数字为其与峰①之间的分离度。
HPLC Conditions
色谱柱 : CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm
流动相 : 磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾2.72g，加水溶解并稀释至1000 mL） / 乙腈 = 45 / 55
流 速 : 1 mL/min
温 度 : 35°C
检 测 : 265 nm
进样量 : 20 µL
样品浓度 : 0.02 mg/mL
苦参碱也是一个经典应用数据，按照2015年版《中国药典》方法进行分析，可以得到符合药典要求的良好分离结果，且峰形良好。
- 传送门 -
http://www.sanyofine.com.cn/uploads/soft/170905/1-1FZ5160P4.pdf
*长按复制链接至浏览器即可浏览~
柱效评价
已经使用过离子交换模式（使用过含盐流动相）之后的氨基柱，和未用过盐相的氨基柱的柱效测定方法一样吗？还会得到一样的结果吗？
*注：峰①-③依次为：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖
仍然使用上面的柱效测定方法，左图为使用过盐的氨基柱，右图为未使用过的，可以看到，峰形、保留时间均出现了较大变化。
这是因为，使用过含盐流动相、在离子交换模式下分析过的氨基柱，其表面性质已经发生了变化，用糖类作为标准物质进行柱效测定已经不具参考意义，因此，建议用相应的分析项目进行柱效评价。
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CAPCELL PAK NH2的使用及维护
首先，我们拿到一支新色谱柱时，可以先查询官网了解基本信息~
访问我们的官网可以看到产品一览，每一款色谱柱的页面内都有产品介绍和说明书，建议大家在初次使用一款柱子之前先查询一下pH使用范围和耐压值等信息哦~
http://www.sanyofine.com.cn/index.html
*长按复制链接至浏览器即可浏览~
▲官网首页
▲氨基柱在这里哦~
▲CP系列共享一套最全の说明书~
▲内附所有色谱柱的pH范围表
言归正传，接下来对氨基柱的使用及维护进行说明~
氨基柱的使用与保存
1.冲洗系统
开启色谱仪，接两通，用纯水冲洗30min，置换仪器及管线内的保存液
2.置换与平衡
HILIC模式：流动相通常为水/乙腈
→用水/乙腈冲洗系统，将纯水置换，再连接色谱柱，平衡系统
离子交换模式：流动相通常为含盐水溶液/乙腈
→先用不含盐的水溶液冲洗系统，将纯水置换，再接入色谱柱继续冲洗，从低浓度开始逐渐置换过度，防止盐析（CAPCELL PAK NH2出厂保存液为100%乙腈）；接着继续平衡色谱柱和系统。这时可以边进样边平衡，观察样品保留时间的变化。
▲氨基柱的出厂保存液是纯乙腈哦！！！
3. 保存方法
HILIC模式：
→使用流动相（乙腈/水）封存色谱柱，拧紧堵头，将色谱柱保存在阴凉干燥处
离子交换模式：
→将盐溶液冲洗置换为不含盐高有机相，后续操作与上同
一个月以内的短期保存：
请使用与所选用流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液（不含酸、无机盐）进行置换，请避免使用纯水进行置换；
一个月以上的长期保存：
在进行了上述处理之后，请用出厂时的保存液（100%乙腈）置换并保存 ；
使用注意事项
①不要使用100%水冲洗色谱柱
②新氨基柱出厂保存液为100%乙腈，若要置换成含无机盐的流动相，请注意不要发生盐析
③要严格控制流动相pH在使用范围之内（氨基柱pH使用范围为2-8）
④氨基柱所需平衡时间较长：
HILIC模式：在水/乙腈系下分析糖类物质时，需要平衡4～5小时
离子交换模式：使用含盐流动相时，最好小流速平衡过夜
这篇真的好长哦。。YoYo吐血总结，大家看累了没有？一次看不完没关系，先收藏着，以后慢慢看~
都看到这里了，一定是真爱~如果喜欢就点个赞吧~给你小心心~biu~
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