三步并作一步走，单克隆筛选还能这么玩？

赛多利斯实验室

2023.3.22

作者赛多利斯

TA的动态

作为细胞系开发流程中承上启下的关键节点，克隆筛选和验证分析步骤不仅决定了用于下游生产的细胞系质量，而且是提速优化的重要环节。此步骤筛选出的克隆不但需要具有单克隆源性，还要保证高生长率以及高表达量，以便为下游扩大培养奠定坚实基础。

细胞系开发流程示意图

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但是传统的单克隆筛选技术“又累又贵”，诸多技术瓶颈亟待突破：

速度通量无法满足需求：传统方法（如有限稀释）通常需要花费5-8周的时间筛选大量96孔板，而且需要搭配多种分析工具进行CQA（关键质量属性）分析；
高剪应力分离损害细胞活力：流式分选（FACS）以及单细胞打印等方法通过对细胞施加压力分离单个细胞，损害细胞健康。

告别007！告别Dead克隆！

单克隆筛选不该那么麻烦！

CellCelector Flex全自动无损细胞分离系统提供创新单克隆挑取方案 ——基于纳米孔阵列和图像验证的高通量克隆（HT-NIC）技术，三步并作一步走，一轮挑取=融合单克隆性验证+克隆生长及健康评估+产率分析，狠狠简化了单克隆筛选流程。

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HT-NIC 技术得益于CellCelector 纳米孔板。这些培养板具有多种不同的规格，每个孔底部有数千个微型的纳米孔。比如24 孔板纳米孔的每个大孔有4,000个纳米孔，整个孔板有100,000个纳米孔。这些200 μm的孔可以将单细胞有效地分隔开来，而且纳米孔内的细胞被同一种培养基所覆盖，因此可实现有效的细胞共培养以提高存活率。

纳米孔放大示意图

纳米孔板工作原理

简化并加速单克隆筛选流程

HT-NIC的细胞铺板方式与传统有限稀释相似，将细胞以一定比例接种到孔中，按照经典泊松分布沉降在纳米孔中被有效分隔。CellCelector软件可以自动扫描整孔并鉴别包含单细胞的所有纳米孔，并提供完整的图像验证单克隆性。

CellCelector NT-NIC技术仅需不到一周即可完成传统技术八周的工作量，且自身强大的成像与分析功能可同步进行全自动的单克隆性验证，克隆生长以及分泌物产量分析。

传统方法与HT-NIC流程对比滑动查看

提供100% 单克隆性

CellCelector HT-NIC 克隆方法通过自动鉴别单细胞纳米孔，跟踪其生长到克隆，并将生长的克隆无交叉污染地转移到96 孔板中，从而提供 100% 的单克隆孔，不依赖于样品制备方法、细胞类型或铺板密度。

有限稀释及HT-NIC法获得单克隆孔的概率对比

提高通量，节约耗材

传统有限稀释法，需要将Pool接种到至少20块96孔板中，如果按照理想的单克隆筛选率为20%计算，则可筛选到的单克隆孔数约为400个。而对于纳米孔板来说，一个大孔的单克隆筛出量就远远超过400个！因此可以大大节约孔板和培养基消耗量。

单克隆筛选技术	传统有限稀释法	HT-NIC
消耗孔板量	20 块标准96孔板	24孔纳米孔板一个大孔
铺板密度	0.2个细胞/孔*	2k - 4k个细胞/大孔
接种细胞总体积	400 mL20块板100个孔200μL每孔	1mL
单克隆筛出量	384个单细胞孔#	500-600单细胞孔
单克隆性及生长验证	需要通过成像进一步验证	已验证单克隆性和生长率