环状RNA（CircRNA）以稳定性、免疫原性低，半衰期长、无需加帽和加尾等优势吸引多家疫苗企业纷纷布局。毛细管电泳技术可有效分离CircRNA疫苗产品中CircRNA、前体线性RNA（Precursor RNA）、未成环RNA（Nicked RNA），是CircRNA疫苗质量控制的有力分析工具[1]。作为高通量的毛细管电泳分析系统，BioPhase® 8800 系统可在一个系统中通过8根平行的毛细管同时进行检测分析，以8倍的通量获得与PA 800 Plus同质量的数据，为生物工艺、分析开发和QA/QC提供高通量分析。
结果
使用同一长度（1765 nt）、不同纯化阶段的样品考察CircRNA与其他杂质的分离，根据对照品迁移时间对样品中Nicked RNA、Precursor RNA进行定性，CircRNA出峰最晚[1]，结果见图1，CircRNA与Precursor RNA等杂质可实现良好的分离。通过BioPhase软件对样品中各峰进行积分，并以CircRNA校正峰面积占总峰面积的百分比表示纯度，未纯化和纯化后的CircRNA样品的纯度分别为71.45%，92.44%。
图1. BioPhase® 8800 系统分离分析不同纯化阶段的CircRNA样品
利用CGE-LIF方法考察了三个不同长度（744 nt，1765 nt，3589 nt）的样品中，CircRNA与其他杂质的分离情况，见图2，峰1、3、5分别为744 nt，1765 nt，3589 nt的precursor RNA峰，峰2、4、6分别为744 nt，1765 nt，3589 nt的CircRNA峰（鉴定数据未展示）。对于Precursor RNA与CircRNA 的分离， CircRNA环状构象体积起到主要的分离作用，由于长度越长，环状构象体积越大，因此其与线性RNA的分离度也越大；对于Precursor RNA与Nicked RNA 的分离，由于两者都是线性的结构，其分离度规律为长度越长，分离度越小。各峰的分离度统计结果见表1。
图2. BioPhase® 8800 系统分离分析不同长度的CircRNA样品。样品A：744 nt；样品B：1765 nt；样品C：3589 nt；1、4、7号峰：Nicked RNA；2、5、8号峰：Precursor RNA；3、6、9号峰：CircRNA
表1. 不同纯化阶段、不同长度的CircRNA样品分析结果
注：MT：迁移时间；CAP%：校正峰面积百分比，即纯度；R：分离度
结论
本文介绍了利用BioPhase® 8800 系统对CircRNA疫苗及产品相关杂质进行了高通量的分离分析
1
方法对不同长度的CircRNA样品（700 nt-3600 nt）均可实现分离分析，且CircRNA长度越长，相应的Precursor RNA 与CircRNA分离度越大，Precursor RNA与Nicked RNA分离度越小；
2
方法可同时进行8个样品的检测分析，6小时可完成96个样品的检测，平均每个样品用时为3.9 min，显著提高了大量样本的分析检测效率；
3
方法可准确反映不同纯化程度样品中CircRNA的纯度变化，以高效评价CircRNA疫苗的环化效率、纯化工艺、产品质量等。该方案可更快速地评估样品性质，加快产品从研发到上市的时间。
参考文献
[1] SCIEX Tech Note：CGE-LIF方法对环状RNA疫苗的纯度分析（RUO-MKT-02-15386-ZH-B）
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