高通量基因敲除细胞系(池) 构建服务

氨探生物

2023.12.01

氨探生物是品生医疗旗下一家由组学质谱技术精英团队匠心多年打造的精准医疗高科技公司，致力于成为全球领先的蛋白质组学、代谢组学临床转化全流程解决方案服务商。

1. 什么是高通量基因敲除？

高通量基因敲除利用CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物（RNP）敲除技术，结合自动化移液工作站平台，可实现大规模、高效的基因编辑。在新药靶点发现和大规模基因功能研究等前沿领域，高通量基因敲除展现出巨大潜力，为药企和科研客户提供了一个高度灵活且可定制的基因编辑平台。目前，已有超过上千篇文章采用RNP基因敲除方法，并且逐年增加。该方法正在逐渐替代慢病毒法和质粒法，成为高通量基因敲除的首选方法。

高通量基因敲除推动基因敲除领域发展出3大趋势：

01. 阵列KO库（Arrayed library）取代混合KO库(Pooled library)

传统的混合KO库仅适用于筛选有限的细胞表型（例如细胞死亡或富集），其灵敏度受混合库质量的制约，依赖深度测序和生物信息学进行数据解读。相较之下，阵列库可用于任何形式的表型筛选，具有极高的灵敏度，无需深度测序和复杂的生物信息学支持即可找到引起表型变化的靶点。

02. RNP 法逐步取代慢病毒和质粒法

由于RNP方法具有高效编辑、低脱靶效应和低毒性的特点，已经成为基因敲除和编辑的主流方法。

03. 高敲除效率 KO pool 替代 KO cell line

经过优化的RNP基因编辑方法具有非常高的效率，在不进行单克隆的情况下就能够达到超过80%的KO效率。因此，对于表型确认，通常可以直接使用KO细胞池，极大地节约了试剂开发成本和时间周期。

为什么 RNP 法会成为高通量基因敲除的首选方法？

更高的编辑效率：RNP法能够在短时间内实现高效的基因敲除，从而显著缩短实验周期；
更低的毒性：RNP法无需使用病毒和质粒，而是使用化学修饰的RNA，稳定性更强。同时，避免了激活细胞内的DNA/RNA免疫识别通路，显著降低细胞毒性，尤其是在免疫细胞中的毒性；
较低的脱靶效应： RNP法不涉及基因组整合，导入的Cas9蛋白质在细胞内72小时内可被降解，相较于传统方法具有更低的脱靶风险；
更简便的实验操作：RNP法简化了实验流程，节省了实验时间和成本；
更快的实验周期：由于高编辑效率和简便的操作，RNP法能够显著缩短整个实验周期。

为什么选择氨探生物提供的基因敲除服务

01. 300+细胞系的蛋白质组信息，确定目的基因表达信息，适用于后续表型实验

来源于人和小鼠的免疫细胞、iPS细胞、300+常见肿瘤细胞系等多种细胞类型，以满足不同客户的需求
提供 300+肿瘤细胞系的大规模蛋白质组学数据，确认靶基因在特定细胞系的表达情况，帮助客户选择合适的敲除细胞系

02. 包含670个细胞系的近千万个基因必要性信息数据库（Gene Fitness Library）

提供丰富的生物信息学数据，为基因必要性分析提供支持，帮助客户深入理解基因功能；我们还推荐KO/KD方案，评估基因敲除前的实验风险，确保实验的有效性和可行性

氨探生物能够利用RNP-CRISPR高效编辑iPSC分化的巨噬细胞，而不影响细胞表型

03. 采用RNP递送结合高度优化的电转染体系，自动化完成基因编辑实验

氨探生物的RNP-CRISPR法毒性低，编辑效率高

采用高效RNP基因敲除技术构建KO细胞系。在2-3周内获得编辑效率超80%的KO细胞池，4-6周内获得100%敲除效率的KO细胞系
氨探生物团队有超22,000次的基因敲除经验，拥有自动化、高通量基因敲除标准化生产平台，能够实现每月400+高敲除效率KO细胞的生产，是业内具备短期交付2,000+大规模基因敲除细胞产品能力的国内基因编辑细胞供应商