气相色谱法测量游离脂肪酸含量的介绍

　　一、游离脂肪酸

　　取样品，于100mL 离心管中，加入二氯甲烷－甲醇溶液( V/V = 2∶1)，0.0001g，然后匀浆、4000r /min 条件下离心5min； 取出离心管后，分别取下层溶液和上层溶液于具塞试管中，加入20%的0.88% KCl 溶液后混匀，过夜分层后取下层液体真空干燥，所得物质即为粗脂肪。当得到总脂肪后，加入酮－甲醇溶液( v /v = 2∶1) 和Amberlyst－A26 阴离子交换树脂于恒温振荡器中震荡2h 后去除溶液，用丙酮－甲醇溶液洗5 次( 共用20mL) ，最后在通风橱中用氮气将交换树脂吹干后待甲酯化 [3] 。

　　二、甲酯化

　　在圆底回流瓶中加入提取的油脂或吸附后的树脂并加5mL 0.5mol /L 的氢氧化钠甲醇溶液混匀后连接回流装置。在100℃水浴中加热回流5min，然后加3mL 三氟化硼－ 10% 甲醇溶液反应5min，最后加入2mL 正己烷回流萃取2min，取出冷凝装置将回流瓶冷却至室温后加NaCl 饱和溶液混合，并将其移入具塞试管中，反复冲洗回流瓶3 次将洗液一并倒入具塞试管中静置。待分层后吸取上层溶液( 正己烷层) 约lmL 于样品瓶中，于4℃下保存，以备气相色谱仪分析。

　　三、GC 条件

　　气相毛细管柱为Agilent SP－2560，100m × 0.25mm i.d × 0.2μm，柱初始温度60℃，以8℃ /min 升温至180℃，1.5℃ /min 升温至240℃，保持3min； 气化室温度250℃； 载气: N2； 柱流速:1mL /min； 分流比: 30∶1； 进样量1μL。

　　四、数据分析

　　结果采用与标准品对照法定性及内标定量，并以平均值± 标准偏差( mean ± SD) ( n = 5) 的形式表示。数据采用SPSS 16.0 统计分析软件进行数据分析，利用方差分析( One－Way ANOVA) 检验数值间的差异显著性，当p < 0.05 时视为具有显著性差异。