前言
β-胡萝卜素是一种天然色素，有多种异构体和衍生物，其中在分子结构中含有β-紫罗宁残基的类胡萝卜素，在人体内可转化为维生素A，称为维生素A源。它是人体重要的营养素，常用作食品着色剂、营养加强剂而添加于食品中。它还是一种有效的生物抗氧剂，能淬灭单线态氧，捕获体内自由基，减少机体的氧化损伤。
本文根据GB 5009.83—2016《食品安全国家标准 食品中β-胡萝卜素的测定》建立了利用高效液相色谱测定奶粉中β-胡萝卜素的方法，供食品行业相关分析人员参考。
LC-5520液相色谱仪
PART ONE
实验部分
实验原理
试样经皂化后，使β-胡萝卜素释放为游离态。用石油醚萃取二氯甲烷定容后，采用反相色谱法分离，外标法定量。
仪器设备与试剂
LC-5520 液相色谱仪（紫外检测器）；
AS-405 自动进样器；
DM-101 在线脱气机；
无水硫酸钠（Na2SO4）;
抗坏血酸(C6H8O6);
石油醚;
木瓜蛋白酶；
α-淀粉酶；
甲醇(CH4O);
乙腈(C2H3N);
二氯甲烷(CH2Cl2);
三氯甲烷(CHCl3);
无水乙醇(C2H6O);
氢氧化钾(KOH);
β-胡萝卜素标准品。
实验条件
色谱柱：C18反相色谱柱（粒径 5 μm，250 mm×4.6 mm）；
流动相：三氯甲烷－乙腈－甲醇=3+12+85；
流 速：2.0 mL/min；
检测波长：450 nm；
柱温：：35 ℃±1 ℃；
进样量：20 μL。
样品处理
溶解
称取混合均匀的固体试样约1~5g或液体试样5~10g（均精确至0.001 g），置于250 mL三角瓶中加入1.0 g抗坏血酸。固体试样需用50 mL 45 ℃～50 ℃的水溶解并混合均匀，然后加入0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶（若无淀粉，可不加淀粉酶），置于55℃±1℃恒温水浴箱震荡。
皂化
将75mL无水乙醇加入到上述试样溶液中，混匀后加入25 mL氢氧化钾溶液，置于53 ℃±2℃水浴中皂化约30min ，冷却到室温。
提取
将皂化液转入分液漏斗中，加入100 mL 石油醚萃取两次，合并有机相，用水洗至近中性。有机相加入无水硫酸钠干燥、过滤。滤液于40 ℃±2 ℃下减压浓缩至近干。最后氮气吹干。然后加入5.0 mL二氯甲烷使其溶解，用0.45μm膜过滤，滤液备用。（注：实验操作过程中应注意避光。）
PART TWO
实验结果
标准谱图
图1. 4.0μg/mL标准工作液谱图
图2.β-胡萝卜素标准曲线
样品检测
将试样待测液进行色谱测定。记录组分色谱峰面积，根据标准曲线计算出试样待测液中β-胡萝卜素的浓度。
图3.样品谱图
PART THREE
实验总结
本文根据国家标准GB 5009.83-2016《食品安全国家标准 食品中β-胡萝卜素的测定》，建立了利用东西分析LC-5520高效液相色谱测定奶粉中β-胡萝卜素的方法。该方法操作简单、线性良好、结果准确，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值未超过算术平均值的10 %，符合国标要求。
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