沃课堂 | 液相故障排除之H-Class系统不出峰

H-Class系统不出峰影响因素比较多，故障排除时先检查简单的部分，然后再进行仪器硬件排查。

检测内容

方法

必须仔细检查仪器方法。仪器方法变更条件时，由于名称相同而会被覆盖，必须仔细查看方法里的参数是否正确，例如：波长、流动相、柱温等。检测器采样速率设置是否合理也会影响出峰，若是UPLC 1.7 µm柱，峰型应该比较窄，故检测器采样速率建议设置为20点，待有目标峰后再适当调整。

确认该测试方法原来测试过，则比较二者方法间的差异及测试运行参数(如压力/能量等)；该测试方法若过去没有测试过，请先测试另外一个已测试过的样品(最简单的是运行柱效测试或性能测试)，以验证仪器系统是否正常，而对没有出峰的测试方法再核查方法来源的可操作性。

样品

样品是否出错，样品是否已变质或分解，样品瓶位是否放错，样品量是否足够，溶解样品的溶剂是否变化。

流动组

流动相是否正确，是否放错流路，如原来放A路，现在放到B路，但在软件里没做相应的修改。流动相是否变质，水和缓冲盐容易长菌，建议现配现用，每天更换。流动相里的有机相是否已挥发，溶剂瓶要用合适的瓶盖盖好。

柱子

柱子的颗粒度、内径、长度和品牌是否正确，柱子是否被污染，是否有预柱。

仪器硬件排查

检查H-Class系统的色谱柱前、柱后，直至连接检测器的管路接头等是否有漏液。

观察系统压力，如果压力低或压力波动，建议在UPLC的Console界面进行QSM的Prime，并检查溶剂过滤头，单向阀，泵杆和密封圈。

充分灌注进样器SM FTN的注射器(建议Purge Solvent做20个cycles)并注意观察，保证注射器里充满Purge Solvent且没有任何气泡或漏液。另外，可以用称重法进一步检查进样器是否有问题，用样品瓶装1 ml左右的水，先称重量，然后进20针10 µl水后再称重，使用100 μl注射器，减重理论值应在196～204 mg之间，如果重量没有变化，说明样品没吸进去。

检测器有问题也会导致不出峰。以最常用的TUV为例，TUV在流通池充满甲醇的状态下查看230 nm波长的能量，正常情况下，Sample能量应该是Reference 能量的70%以上，如果小于70%，说明流通池污染了。建议接两通，用水、甲醇等充分冲洗。如果Reference能量本身很低，则需更换灯或光路系统其它配件。

TUV检测器查看能量

性能测试

测试结果判断

（以TUV/PDA检测器10 mm流通池为例）

峰面积及保留时间的确认

进样六针咖啡因，峰面积RSD≤0.5%，峰高RSD≤1.1%，保留时间SD≤1.0s

梯度性能测试（A/C水，B/D乙腈）

进样三针保留时间的SD≤1.5s

根据上述的故障排查步骤，可以快速找到H-Class系统不出峰的原因，然后再采取相应措施，让检测状态尽快恢复到正常水平。

相关阅读：

液相故障排查之H-Class系统压力高

液相故障排查之Alliance交叉污染