前言
喹诺酮类（4-quinolones），又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗菌药，因其抗菌谱广泛，抗菌活性强，可用于预防和治疗食品动物和人类的多种感染性疾病。这些药物在兽医临床中广泛和大量的使用会导致其在动物性食品中的残留，人食用动物组织后喹诺酮类抗生素就在人体内残留蓄积，造成人体疾病对该药物的严重耐药性，严重危害人类的健康，其残留问题备受关注。美国FDA于2005年宣布禁止用于治疗家禽细菌感染的抗菌药物恩诺沙星的销售和使用。我国也于2002年规定了环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸和氟甲喹等7种QNs药物在动物肌肉组织中的最高残留限量为10～500μg/kg。
本实验以蜂蜜样品为例，旨在建立一个快速高效的喹诺酮类残留净化方法。实验利用普立泰科公司全自动固相萃取仪SPE 432对蜂蜜中多种喹诺酮残留进行萃取，LC-MS/MS分析检测，结果表明该方法回收率在72%-113.56%之间，且具有较好的平行性，适合蜂蜜、蜂王浆等动物源性食品的兽药残留分析。
参考标准：GB/T 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法。
普立泰科 全自动固相萃取仪SPE 432（四通道）
仪器设备与试剂
仪器设备
全自动固相萃取仪SPE 432 （北京普立泰科仪器有限公司）
三重四极杆液相色谱质谱联用仪（赛默飞世尔）
萃取柱：MCX 柱（60 mg，3 mL）
试剂
提取液：0.2mol/L的PBS缓冲液
甲醇：HPLC级
氨水：优级纯
水：超纯水
实验方法
提取
准确称取蜂蜜样品5g（精确到0.01g），加入15mL样品提取液，涡旋混匀1min，离心后过滤取上清液，待净化。
净化
将过滤后的上清液置于全自动固相萃取仪样品管中，在软件中设置净化方法，如下图所示，洗脱液收集之后进行氮气吹干，用甲醇：水（3:7）定容至1mL，LC-MS/MS进行检测。
图1 SPE净化方法
LC-MS/MS条件
色谱柱：Varian C18
流动相：0.1%甲酸：甲醇（梯度洗脱）
离解电压：2.5kV
鞘气流速：55arb
辅助气流速：10arb
进样量：25μL
表1 待测物质的保留时间及特征离子参数
实验结果
八种喹诺酮类物质的色谱图出峰时间如下图所示:
图2 喹诺酮类物质色谱图
加标回收率结果
LC-MS/MS测定样品中8种喹诺酮类物质的回收率结果如表2所示，加标回收率平均值为72%-113.56%，RSD为3.05%-8.97%。
表2 蜂蜜喹诺酮类物质的回收率结果
结果与讨论
本文参考GB/T 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法，使用普立泰科全自动固相萃取仪SPE 432对蜂蜜中喹诺酮类物质进行萃取处理，氮吹仪浓缩仪后，LC-MS/MS检测得到回收率范围为72%-113.56%，RSD为3.05%-8.97%，回收率高，重现性良好，说明全自动固相萃取仪SPE 432适用于蜂蜜、蜂王浆等动物源性样品中兽残类物质的前处理分析。
关联仪器
全自动氮吹浓缩仪EVA 32
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