利巴韦林又名病毒唑、三氮唑核苷、尼斯可等,是广谱强效的抗病毒药物,因具有溶血性贫血、遗传毒性和生殖毒性等副作用,我国早在2005年就明令禁止利巴韦林等人用抗病毒药兽用。近年来利巴韦林也成为国家食品安全监督抽检的重要项目。
目前利巴韦林常用的检测方法为《SN/T 4519-2016 出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》,迪马科技参考相关标准,优化方法过程,采用新推出的PBA固相萃取柱产品,结合耐纯水的Spursil C18-EP极性改性液相色谱柱,推出鸡肉和鸡肝中利巴韦林检测方法。该方法具有回收率高、稳定性好、净化效果优异等特点,可供广大分析工作者参考。
利巴韦林的检测
UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方案适用于鸡肉、鸡肝等动物源性食品中利巴韦林的检测。
2、标准品配制
(1) 利巴韦林储备液1.0mg/mL:准确称取适量标准品,用甲醇配制成利巴韦林1.0mg/mL的储备液;
(2) 利巴韦林中间液:分别吸取适量单标储备液,用甲醇配制成1.0μg/mL 和0.05μg/mL的中间液;
(3) 利巴韦林-13C5内标储备液100.0μg/mL:利巴韦林-13C5,甲醇配制,直接购买的储备液;
(4) 利巴韦林-13C5内标中间液:吸取适量内标储备液,用甲醇配制成0.1μg/mL中间液。
3、提取
(1) 称取5g样品,加入利巴韦林-13C5内标中间液100μL,12mL三氯乙酸提取液(pH 4.8)*,和2.5mL乙腈,振荡提取10min,6000rpm离心2min,取上清液;
(2) 下层残渣再用10mL三氯乙酸提取液(pH 4.8),重复提取一次;
(3) 合并两次提取液,并定容至25mL,取出5mL。
*三氯乙酸提取液(pH 4.8):称20g三氯乙酸,加入950mL水溶解,用氨水调节pH至4.8,用水定容至1000mL。
4、酶解
(1) 5mL提取液加入1mL 2mol/L乙酸铵(pH 4.8)*,加入100μL酶*,涡旋混合1min,放入37℃烘箱加热反应2h。
(2) 酶解完成后,拿出冷却到室温,加入氨水,调节pH至8.5,混匀,6000rpm离心2min,取出上清液待净化。
*2mol/L乙酸铵(pH 4.8):称取7.7g乙酸铵,加入45mL水溶解,然后用乙酸调节pH至4.8;
*酶溶液的配制:固体酶制剂:酶活度:10.4u/mg磷酸酯酶,取适量酶制剂,用水稀释至酶活0.04u/mL。
5、净化
ProElut PBA 100mg/3mL (Cat.# 68403)
(1)活化:依次用3mL乙腈、3mL乙腈-1%甲酸水*、3mL乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)*活化;
(2)上样:加入待净化液,弃去流出液;
(3)淋洗:依次用5mL 10%乙腈-乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)*、2mL 5%氨水甲醇淋洗,弃去流出液,小柱真空负压抽干0.5min;
(4)洗脱:加入2mL 0.5%甲酸水,抽干小柱,接收全部流出液混匀,过Nylon膜(Cat#:37177)上机分析。
*乙腈-1%甲酸水:乙腈:1%甲酸水(体积比3:1);
*乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5):称取3.85g乙酸铵,加入180mL水溶解,然后用氨水调节pH至8.5;
*10%乙腈-乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5):乙腈:pH 8.5乙酸铵缓冲溶液(体积比1:9)。
6、分析条件
UPLC 条件
色谱柱:Spursil C18-EP, 150x2.1mm, 3μm (Cat#:82113)
流 速:0.4mL/min
进样量:10μL
柱 温:35℃
流动相:A: 0.2%甲酸水 B: 乙腈
梯度
质谱条件
电离模式:ESI
扫描方式:正离子扫描
检测方式:多反应监测
电喷雾电压:5500V
雾化气压力:50psi
辅助气压力:50psi
气帘气压力:20psi
离子源温度:500℃
7、添加回收结果
8、相关产品信息