海光讲堂 | 五种常见硒形态的色谱分离及原子荧光检测条件

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1.1  试剂

表1 试剂

注意：硒形态标准贮备溶液自行配制或外购。

1.2  仪器设备

表2 仪器设备

1.3  流动相配制

（1）称取5.44g KH₂PO₄和1.49g KCl于烧杯中，加入约900mL超纯水，搅拌溶解。

（2）用1mol/L KOH溶液调节pH至6.0，用超纯水定容至1000mL，制成含20mmol/L KCl的40mmol/L磷酸盐缓冲液。

（3）用0.45μm水系膜过滤，然后置于超声波清洗器中，真空泵辅助脱气30min。

1.4  硼氢化钾和盐酸溶液的配制   

（1）硼氢化钾溶液（35g/L）：称取35.0g硼氢化钾，溶于1000mL 5g/L氢氧化钾溶液中，搅拌均匀。此溶液现用现配。

（2）20%盐酸溶液：移取200mL浓盐酸，用超纯水定容至1000mL，搅拌均匀。

（3）0.15%KI消解液：称取0.50g氢氧化钾，1.50g KI，溶于1000mL超纯水中，混匀。

1.5  标准溶液的配制

标准使用液，用流动相稀释至所需的浓度。

1.6  色谱-原子荧光联用仪的分析条件

表3 色谱分离条件

表4 原子荧光检测条件

注意：以上条件仅供参考，可根据样品含量适当调整负高压和灯电流。

2.1  分离谱图

图1 10ng/mL(SeCys)₂、10ng/mL SeMeCys、5ng/mL Se(IV)、10ng/mL SeMet、10ng/mL Se(VI)分离谱图

图2 100ng/mL (SeCys)₂、100ng/mL SeMeCys、50ng/mL Se(IV)、100ng/mL SeMet、100ng/mL Se(VI)分离谱图

2.2  校准曲线测试数据及校准曲线

表5 校准曲线测试数据

图3  硒代胱氨酸((SeCys)₂)校准曲线(5、10、30、60、150、200ng/mL)

图4  甲基硒代半胱氨酸(SeMeCys)校准曲线(5、10、30、60、100、200ng/mL)

图5  亚硒酸根离子(Se(IV))校准曲线(2.5、5、15、30、50、75ng/mL)

图6  硒代蛋氨酸(SeMet)校准曲线(5、10、60、100、150、200ng/mL)

图7  硒酸根离子(Se(VI))校准曲线(5、10、30、60、100、200ng/mL)

2.3  重复性测试数据(手动进样)

表6 重复性测试数据

图8  (SeCys)₂、SeMeCys、Se(IV)、SeMet、Se(VI)7次重复性测试谱图

2.4  检出限测试数据

表7 检出限测试数据

图9  (SeCys)₂、SeMeCys、Se(IV)、SeMet、Se(VI)检出限测试谱图

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