电荷异质性表征对生物治疗药物的开发至关重要。许多电荷异构体都会影响药物的效价和疗效，需要尽可能掌握电荷异构体可能产生的影响，并在整个发现、开发和生产过程中对电荷异构体进行监测。
离子交换色谱(IEX) 作为一种经典的电荷异构体表征的分析技术具有色谱重现性好、上样量高的特点。但是，IEX分析往往需要高浓度盐，与质谱(MS)不兼容，无法直接表征电荷异构体。
沃特世最新设计了一种基于IonHance CX-MS pH浓缩液的流动相系统，使用这种浓缩液能够迅速制备出经过优化的铵类流动相，进行MS兼容的IEX分析。
✔ 直接研究新出现的峰或者强度增强的峰，大大缩短时间，减少向MS中心实验室送样的次数。
✔ 消除制备收集过程的繁琐及处理样品可能导致的人为降解。
✔ 不受盐加成物的干扰，得到高质量的质谱数据。
下面小编将与大家一起分享如何利用IonHance CX-MS pH流动相系统、BioResolve SCX色谱柱、BioAccord系统构成的强大的电荷异构体分析新平台的精彩案例。
完整蛋白和IdeS酶解物的表征
研究电荷异构体时, 通常需要繁琐的馏分收集和缓冲液置换，或是采用复杂的2D-LC仪器设置，才能采集到质谱数据。
本研究以NIST mAb和英夫利昔单抗为例，电荷异构体主要与C端赖氨酸的存在有关。使用该方法时，IEX色谱分析能够很好地分离C端赖氨酸变体，直接通过MS检测轻松确认。该IEX方法可应用于各种mAb样品，且无需大范围地逐个进行梯度优化。10 µg载样量配合2.1 mm内径色谱柱便足以检测相对丰度低至1%的变体。
实验数据图▼
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药物稳定性监测
显然，对分子量相同或相近的物质（如存在脱酰胺或构象差异）进行评估是该类分析所面临的主要难题。上述电荷异构体与完整抗体之间在质量数上几乎没有或者完全没有差异，很难按完整质量数准确地分辨这些变异体。如果这些峰确实具有相同分子量或属于脱酰胺类，则需要可靠的肽水平表征进行确认。
在曲妥珠单抗的案例中，实测的酸性变异体水平很好地表征和预测了脱酰胺敏感性。实际应用中，直接IEX-MS方法对证实分子量相近种类相关假设以及排除其它可能变异体非常有帮助。
此外，采用色谱分离法相较于其它电荷类分离方法（如毛细管电泳或等电聚焦）更便于收集馏分以及进行其它类型的测试，具有明显优势。经IEX分离的变异体峰仍可以进行收集并通过肽图分析确认修饰位置，也可以分离后供效价强度分析使用。
总 结
■ 使用BioResolve SCX色谱柱、IonHance CX-MS pH浓缩液和BioAccord LC-MS系统可轻松开发出平台方法，得到稳定且可重现的分离结果和高质量质谱，从而鉴定不同的mAb电荷异构体。
■ 这一流程可以获得基于MS峰匹配的明确结果，避免馏分收集，并能提高电荷异构体的表征和监测效率。
■ 简便的缓冲液制备、稳定的色谱分离以及清晰的MS谱图可以提高分析通量，加快生物药物开发的决策速度。
感恩回馈
- Notification -
为了更好地助力IEX-MS提速，沃特世在年终之际特别推出感恩回馈活动。凡购买：
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注：
1. 本次优惠活动截止2019年12月31日。
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