“
点击蓝字 关注我们
“氨基酸(aminoacids)是组成蛋白质的基本单位”，在人的生命活动中不可或缺。
氨基酸分析仪，是用于测定蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的仪器。进行氨基酸分析前，必须将蛋白质及肽水解成单个氨基酸。它是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱仪。有的样品中氨基酸以游离态存在，而有的样品中氨基酸以蛋白或多肽形式存在，当然，大多数样品氨基酸以两种形式同时存在。根据关注点不同，我们常常把样品分为水解样品和游离样品。
# 水解样品（蛋白质及多肽） #
图 | 水解样品（蛋白质及多肽）
1 15种常规氨基酸（常规酸水解）
2 含硫氨基酸氨基酸（氧化水解）
氧化水解含硫氨基酸需先用过甲酸将胱氨酸、半胱氨酸氧化为磺基丙氨酸，将蛋氨酸氧化为蛋氨酸砜，此两种物质在酸水解过程中稳定且与其它氨基酸易分离，然后再将蛋白进行酸水解，进行测定。在氧化水解处理过程中，除色氨酸不能测定外，某些芳香氨基酸也可以部分氧化、破坏，而不能测准，因为在HBr作为氧化中止剂时，酪氨酸、苯丙氨酸和组氨酸均会被部分氧化而不能测定，如果用偏重亚硫酸钠为中止剂时，酪氨酸不能测定。
3 色氨酸（碱水解）
碱水解相对于酸水解而言，碱水解时破坏的氨基酸要多很多，但酸水解会被破坏的色氨酸在碱水解时却能保持稳定，因此碱水解就是用以分离色氨酸。通常会使用氢氧化钡，这样水解之后就必须用CO32-或SO42-来沉淀钡离子。而且氨基酸可能会因为沉淀盐的吸附而损失。亮氨酸在碱水解和酸水解过程中都很稳定，它可以用来检查这种吸附产生的损失。
# 游离样品（游离氨基酸） #
图 | 游离样品（游离氨基酸）
游离氨基酸游离样品关注的是样品中的以游离态存在的氨基酸，需要考虑的是提取和除杂质。
1 提取
提取主要针对的是动物组织，植物组织，以及其他含游离氨基酸的固体样品，这类样品需要把氨基酸从固体中提取出来；如果样品中含有牛磺酸，而且用钠系统分析，则应采用A液作为稀释液，用样品稀释液或者水稀释会有轻微干扰，对牛磺酸含量较小的分析会有影响。
2 去除杂质
去除杂质主要是去除样品中可能含有的蛋白质，重金属以及其他干扰物质。金属离子用EDTA去除，蛋白沉淀剂应用较多的有苦味酸、磺基水杨酸（SAA）、三氯乙酸、乙醇等。当样品中含有较多3-6肽（分子量500-1000）时，可用约0.5%磷钼酸进行沉淀，但最终上机时的磷钼酸浓度应小于0.1%(1mg/mL)，脂肪含量高的样品需脱脂（索氏提取）。
结论
本文介绍了经过Scion Artemis 6000实验验证过的含氨基酸样品前处理方法，符合GB/T18246＆GB5009.124等相关标准
首页
