食品检测通关秘籍 | 蜂产品中的氨基糖苷类抗生素残留分析

安捷伦视界

2020.9.23

作者安捷伦

TA的动态

氨基糖苷类抗生素（AGs）对多种革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌具有抗菌效果，目前仍然是我国畜牧业、农业和水产业常用的兽药之一，也常被添加到饲料中促进动物生长发育。然而，该类抗生素可能选择性地损伤第 8 对脑神经，导致前庭和耳蜗神经损伤，且会导致肾近区小管损伤，出现血尿、蛋白尿、肾功能减退等症状。

2020 年 7 月 1 日，农业农村部第 194 号公告正式实施，要求停止生产、进口、经营、使用除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂。因此，大家对分析检测氨基糖苷类抗生素的关注度又达到了新高度。

氨基糖苷类抗生素包括链霉素、双氢链霉素、新霉素、卡那霉素、壮观霉素、庆大霉素、潮霉素、安普霉素等，此类化合物是由一个或多个氨基糖与氨基环己醇通过糖苷键连接而成的苷类化合物，具有极性强的特点，在 C18 色谱柱上通常很难保留。安捷伦开发了一种简便的 LC/MS/MS 分析方法，结合前处理过程，有效对氨基糖苷类化合物进行准确定性、定量分析。

方案介绍

1. 仪器与试剂

Agilent 1290 Infinity 高效液相色谱系统， Agilent 6470 三重四极杆串联质谱系统。甲酸、乙腈均为色谱纯。标准品：链霉素、双氢链霉素、新霉素、壮观霉素、庆大霉素、潮霉素B、安普霉素、卡那霉素，纯度≥99.0%。Agilent Bond Elut Nexus WCX 和 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱。

图 1. Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统

2. 前处理流程

图 2. 固相萃取操作流程

该方法评价了 Bond Elut Plexa PCX 和 Bond Elut Nexus WCX 对 8 种不同氨基糖苷类抗生素的吸附和保留情况，发现大多数氨基糖苷类抗生素在两种 SPE 柱中均具有很好的保留和洗脱性能，仅有链霉素和双氢链霉素在 PCX 柱上保留太强较难洗脱，而壮观霉素，潮霉素和卡那霉素在 WCX 柱上回收率较差，综合考虑，此方法配合使用两种 SPE 柱来完成对 8 种氨基糖苷类抗生素的分析。

图 3. 25 ng/ml 8 种氨基糖苷类抗生素标准品的 MRM 谱图

3. 线性范围与检测限

8 种氨基糖苷类抗生素在浓度 10 ng/ml - 1 ug/ml 范围内线性相关，且线性相关系数均大于 0.99。在信噪比大于 1 和大于 3 时，测得 8 种氨基糖苷类抗生素在蜂蜜和蜂王浆中的检测限分别为 5 - 10 µg/Kg 和 5 - 12.5 µg/Kg，定量限为 15 - 30 µg/Kg 和 15 - 35 µg/Kg，远低于各个国家对于食品中氨基糖苷类抗生素 MRLs 的要求。

4. 结论

本文建立了固相萃取结合液相色谱-串联质谱测定蜂蜜中 8 种氨基糖苷类抗生素残留的分析方法。方法灵敏度满足国际和国内标准对于食品中氨基糖苷类抗生素最大残留限量的要求，方法中流动相无需加入七氟丁酸酐离子对试剂，大大减少了离子对试剂对仪器的污染，有效解决了业内关注的七氟丁酸酐污染仪器的大难题，适合常规实验室对氨基糖苷类化合物分析。