单抗药物集中上市之后，新药开发的重心开始往双抗和融合蛋白方向偏移。然而，由于蛋白的结构更加复杂，其表征的难度也随之加大。
针对其碎片多见的特点，沃特世于去年推出了Bioresolve SEC色谱柱，解决了聚合物和碎片同时分离的问题。
2021年，对于N糖这一关键属性的分析，沃特世做了全面提升，更方便N糖表征，日常的运行也更加稳定。借此机会，我们将分两期向大家分享完整的方案细节。
图1. 双抗结构示意图
对于双抗和融合蛋白项目，结构的复杂性会降低酶切效率，影响N糖分析的回收率。引入还原试剂则可完全消除这一影响。加入DTT后，使N糖位点充分暴露，N糖被完全切除（见图2），从根本上提高了分析的回收率。
图2. 标准方案及DTT还原方案色谱图
注：标准方案已能满足大部分双抗/融合蛋白项目。只有在复杂项目的初期可同时考察此两种方案。
N糖分离方案
双抗/融合蛋白中的N糖容易唾液酸化，从而与不锈钢柱管内表面的金属离子产生离子交换作用，导致回收率降低。
最新的PREMIER Glycan技术，采用独特的钝化工艺，组织了唾液酸化N糖与金属离子的接触。因此出峰更尖锐，回收率也得到了根本改善。
图3. PREMIER色谱柱及常规色谱柱分析唾液酸化N糖色谱图
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