由于中药配方颗粒已经不具备中药饮片性状鉴别的特征，故特征（或指纹）图谱成为表征药材饮片到配方颗粒成品全过程质量一致性、相关性和量值传递规律的主要手段。特征图谱采用相对保留时间（RRT）、相对峰面积进行控制，要求所有特征成分分离良好，因此对色谱柱的分离性能、重现性、耐用性要求很高。已颁布的 160 个中药配方颗粒国家标准中，全部品种均采用了液相特征（或指纹）图谱的方法，色谱柱主要为 C18 柱，部分品种或检项采用了 HILIC、氨基和苯基己基柱。从品种液相分析方法看，160个品种，其中的 89 个品种采用了超高效液相色谱（UHPLC）方法，UHPLC 使用超过一半。
特征/指纹图谱
在已公布的国家标准中，四十多个品种使用到了Agilent 的色谱柱。其中不封端、侧链保护的 Zorbax Stable Bond 系列最常用（12 个 UHPLC 和 5 个 HPLC）；其次封端 Zorbax系列色谱柱（Eclipse XDB及Plus C18）也得到了广泛应用；另外，TC/HC-C18 系列色谱柱在常规 HPLC 中方法适用性也很广泛。
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除少数方法外，含量测定方法一般未标注使用的色谱柱品牌，因此，几乎所有品种均可以选择 Agilent 的色谱柱来完成定量分析。HPLC 方法，选择 Zorbax 系列（如 SB/Plus/XDB-C18）或 TC/TC(2)-C18 系列。UHPLC方法，选择Zorbax RRHD Plus/SB-C18或 SB-AQ，也可选择Poroshell系列色谱柱。含量测定需要满足系统适应性要求，必要时通过柱筛选系统（或色谱柱选择性差异比较）来确定色谱柱。Zorbax 品牌下的 SB/Plus/XDB/Extend 等系列 C18 色谱柱，具有通用性强、批次稳定、耐用、选择性好等特点，可以用于替换标准方法中相同规格的非安捷伦的 HPLC 和 UHPLC 色谱柱。Poroshell 系列色谱柱，可以用来替代标准方法中表面多孔型填料的 UHPLC 色谱柱。常规 HPLC 中，还可以选择对应尺寸的 TC/TC(2)-C18 色谱柱来完成特征图谱和含量测定。使用 Zorbax RRHD SB C18，RRT 完全满足标准要求
使用 TC-C18 色谱柱，RRT 及含量测定完全满足标准要求
配方颗粒特征图谱和含量测定中，最为常见的问题有相对保留时间（RRT）不符合要求、相对峰面积不满足要求、系统适应性中理论板数低、溶剂效应、分离度达不到要求、峰形和峰数量存在差异、保留时间不稳、峰干扰、仪器之间存在差异等。可通过排查：色谱柱选择性、色谱柱性能状态、流动相方法、仪器系统管路、色谱柱连接、样品问题、溶剂、温度等方面来解决问题。在新的国标方法或省级标准方法建立中，可以按照以下原则来选择合适的色谱柱。
配方颗粒品种多、批次多、检验量大，UHPLC 方法成为首选。新建 UHPLC 方法时优先选择 1.8 μm 的 Zorbax Plus-C18 和 SB-C18 色谱柱（封端和不封端的 C18 键合相的代表），在特征图谱和含量测定方法中通用性非常极强。对于极性较强的成分，优先选择 SB-C18 或 SB-AQ 色谱柱；另可选 1.9 μm 或 2.7 μm 的 Poroshell 系列色谱柱。从最通用的色谱柱开始，包括 Zorbax SB-C18、XDB-C18、Plus-C18、TC/TC(2)-C18等。使用 Poroshell 4 μm 色谱柱，可实现更好的分离度、柱效要求。另外，选择 SB-AQ用于增加极性成分的保留、选择 Polaris C18-A 用于选择性改善和增加保留。
中药成分极其复杂，建立快速高效、耐用、易于重现的配方颗粒方法尤为重要。普通 HPLC 仪器系统，可以采用上表 3-4 μm粒径 150 mm 柱长色谱柱，来建立快速 HPLC 方法。另外，选择 Poroshell 2.7 μm 系列色谱柱，在较低压力（<400bar）体系下，建立快速的 HPLC 方法 。
C18 色谱柱用得最多，但并非所有 C18 色谱柱分离结果都一样，其中封端和不封端、极性修饰等带来的选择性差异非常显著。因此，利用色谱柱选择性差异改善分离度是最简便的办法。在配方颗粒的特征图谱或含量测定中，不封端的 SB-C18、封端的 XDB/Plus C18、TC-C18 成为最通用的色谱柱。Poroshell 系列色谱柱中，四种 C18 固定相涵盖了典型的固定相选择性差异要求。关于色谱柱选择性差异的比较，可以参考疏水减法模型（HSM）中相似度因子Fs的计算，来比较不同色谱柱之间的相似（Fs<3）或差异(Fs>3)程度[1]。配方颗粒来源于饮片的水提物，可检出组分（如有机酸、核苷、核苷酸、水溶性维生素、生物碱等）极性较强，色谱柱选择可以使用 SB-C18、SB-AQ、Polaris C18-A 等，这些色谱柱可以从 100% 的水相开始进行梯度淋洗。或可选择苯基柱或五氟苯基柱等用于保留增强或选择性改变。流动相可以考察水相比例、pH、缓冲体系、离子对试剂等。强极性成分，例如关注配方颗粒中的葡萄糖、果糖、蔗糖、甜菜碱等强极性成分，可以使用 HILIC 色谱柱搭配 ELSD 来完成特征图谱或含量测定。在配方颗粒质量控制方法中， Poroshell 系列的 HILIC-Z 色谱柱最为推荐，该 HILIC 固定相上采用带有阴阳两性离子键合，具有非常强的亲水作用和静电作用力，pH 耐受范围宽（1-12），能耐受高温（80℃,pH<7时）。
含有氨基酸的配方颗粒，或动物药品种，可通过氨基酸种类及其比例进行指标性测试。氨基酸的检测方法可采用 HILIC 模式直接分析（建议搭配 ELSD 或 MSD）之外，还可以利用柱前衍生再反相检测的方式来完成氨基酸的高灵敏度检测，参考 Agilent 自动柱前衍生方法[2]。生物碱通常作为特有成分存在药材饮片和配方颗粒中。生物碱分析通常存在峰形异常或保留较弱问题。色谱柱选择封端的 Zorbax Plus-C18 或 Poroshell EC-C18 或 HPH-C18 等，或使用表面带正电荷的 C18 柱如 Poroshell CS-C18 来改善峰形。流动相中可添加 TEA、TFA 等来改善峰形和保留。由于样品基质的影响，色谱柱容易损坏，为了更好地保护色谱柱，延长色谱柱的使用寿命，并获得更好的分析结果，提高实验室效率，推荐下列耗材在 HPLC 和 UHPLC 中搭配使用。
其他配方颗粒相关的色谱柱选择和方法建立、应用问题，请联系Agilent。
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