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GPC与光散射检测器联用测定肝素钠的绝对分子量及分子量分布

东曹分离与纯化
2022.3.04

肝素钠首先从肝脏发现而得名,由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中,是动物体内一种天然抗凝血物质。现在主要从牛肺或猪小肠黏膜提取。肝素作为一种抗凝剂,是由二种多糖交替连接而成的多聚体,在体内、体外均具有强大的抗凝作用。临床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。

本应用是将HLC-8420GPC凝胶渗透色谱系统和LenS3多角度光散射检测器联用,采用TSKgel G3000SWXL色谱柱对肝素钠的绝对分子量及分子量分布进行了表征。

分析条件

仪器:  HLC-8420GPC & LenS3

色谱柱: TSKgel G3000SWXL (7.8mmI.D.×30cm, 5μm)

流动相:  0.2 M Na2SO4(pH 5.0)

流速:  0.5 mL/min

样品浓度:  4.87 mg/mL

进样量:  100 μL

温度:  40℃

标准品:  肝素钠

分析结果

图1  多检测器测试谱图

(紫色曲线为示差(RI)检测器信号,红色曲线为10°角光散射(LALS)检测器信号,蓝色曲线为90°角光散射(RALS)检测器信号,绿色曲线为170°角光散射(HALS)检测器信号)

图2 绝对分子量及RI随流出时间曲线

(紫色曲线为示差(RI)检测器信号,绿色曲线为绝对分子量,随流出时间曲线)

图3  分子量分布和累积分布曲线

(黄色曲线为分子量分布曲线,紫红色曲线为累积分布曲线)

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