VHL-PROTAC
口服给药方案在小分子药物治疗中占主导地位，但由于PROTAC具有较大分子量和相关理化性质，设计口服给药的蛋白降解剂具有挑战性。
目前，绝大部分临床转化的具有口服给药活性降解剂是基于Cereblon（CRBN）E3连接酶，限制了PROTAC潜在疾病治疗范围。
BI公司和Dundee大学的联合研究团队利用von Hippel-Lindau(VHL)/ElonginB-ElonginC(VBC) E3连接酶复合物开发可口服的PROTAC。通过三元晶体结构来指导连接子和出口载体的设计，可产生高活性和具有合适药代动力学特性分子，进而实现口服时体内疗效。研究团队获得先导化合物分子ACBI2，在人全血样本中，相比SMARCA4，ACBI2对BAF（SWI/SNF）复合物ATP酶SMARCA2具有很强选择性，并且在所有测试的细胞系中，都显示出SMARCA2被优先降解。在体内和体外模型进行了药理学评估，在SMARCA4缺陷型癌症中选择性靶向SMARCA2，证明了ACBI2是一种可口服利用的SMARCA2降解剂。
在体外和Ex Vivo实验中，本研究利用毛细管电泳Digital Western（也称为Simple Western）技术进行蛋白质降解量效关系和时效关系曲线精准定量测定，加快蛋白降解剂研发进程。
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具有体内SMARCA2/4降解活性PROTAC三元结构设计
采用两个化合物处理RKO细胞18h后，通过毛细管电泳Digital Western检测SMARCA2 和 SMARCA4 蛋白水平的剂量反应曲线。根据前期研究，利用VHL配体酚类出口载体，测试过可有效降解SMARCA2/4靶点双重降解剂，在此基础上，优化连接子设计，在RKO细胞内实现SMARCA2降解。在完全保留SMARCA4同时，化合物5（Compound 5）实现了SMARCA2部分降解活性（DC50=78 nM, Dmax=46%）。化合物6在体内实验中可抑制肿瘤生长。
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ACBI2降解剂表征：Digital Western检测细胞降解水平
不同浓度和时间下，采用Digital Western检测ACBI2降解A549和NCI-H1568细胞内SMARCA2蛋白质表达水平。体外实验结果表明，ACBI2处理在两个敏感细胞系可导致SMARCA2快速完全降解。
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采用Digital Western定量检测Ex Vivo人全血样本中SMARCA2和SMARCA4表达
采用三个健康供体的人全血样本，采用ACBI2浓度梯度处理，分离获得PBMC样本提取蛋白质，采用全自动Digital Western技术（Simple Western）检测SMARCA2和SMARCA4表达水平变化。下图蛋白表达定量结果表明，可实现SMARCA2几乎完全降解，相比SMARCA4，具有明显的选择性差异。
参考文献：
https://chemrxiv.org/engage/chemrxiv/article-details/61f43059191637263ff753a2
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